本文關(guān)鍵詞：抗HBsAg表位單克隆抗體的制備及HBV血清型夾心ELISA的建立

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【摘要】：目的制備抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位單克隆抗體(mAb),建立HBV血清型夾心ELISA檢測方法。方法將HBsAg亞型蛋白分別免疫小鼠,通過細胞融合、高通量篩選ELISA(HTS-ELISA)篩選后得到雜交瘤細胞株并在無血清培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)。采用蛋白A對抗體進行純化并測定抗體親和力、亞型、特異性,最后建立雙抗體夾心ELISA。結(jié)果HBsAg的亞型蛋白ad、adr及ayw分別免疫小鼠后,其血清效價達到1∶105。細胞融合及HTS-ELISA篩選后獲得4株雜交瘤細胞株。經(jīng)過純化后得到的mAb分別命名為#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,親和力都在1×109L/mol以上。間接ELISA結(jié)果顯示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分別特異性地與HBsAg的"d,y,r,w"表位結(jié)合。用抗HBsAg"a"表位的mAb#3-11分別與這4株抗體組合,進行夾心ELISA檢測。結(jié)果顯示,不同的ELISA組合能特異性地檢測HBsAg的"d,y,r,w"表位。結(jié)論成功制備了親和力高、特異性好的抗HBsAg 4個表位的mAb,建立了檢測HBV血清型的雙抗體夾心ELISA。
【作者單位】： 東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;大慶麥伯康生物技術(shù)有限公司;東北林業(yè)大學(xué)大慶生物技術(shù)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 乙型肝炎表面抗原 單克隆抗體 表位 夾心ELISA
【基金】：黑龍江省發(fā)展高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)專項資金(FW11C201) 大慶高新區(qū)科技專項資金(DQGX10ZS005)
【分類號】：R392
【正文快照】： 乙型病毒性肝炎是一種嚴重威脅人類生命健康的傳染病之一,是一個全球性問題[1]。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)顆粒表面的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)在病毒感染后較早出現(xiàn),是HBV外膜的主要蛋白[2],是提示HBV感染的最直接的標志物[3-4]

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚仲寅,陳茜,楊書豪,李林紅,買凱,詹美云,劉崇柏,王鳳來;乙型肝炎病毒表面抗原a、d、r亞型單克隆抗體的制備與應(yīng)用[J];病毒學(xué)報;1988年03期

【相似文獻】

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7 李向明;肖亮;劉兢;;結(jié)核桿菌熱休克蛋白HSP70359-610和IL-2增強了HBV多表位DNA疫苗誘導(dǎo)的抗病毒免疫作用[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會醫(yī)學(xué)細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2006年

8 岳惠芬;陳茂偉;曹驥;蘇建家;李瑗;吳一遷;;精原細胞介導(dǎo)法建立HBx轉(zhuǎn)基因樹，

本文編號：866767