本文關(guān)鍵詞：AAV-ITR單鏈DNA微載體在小鼠骨骼肌中的表達(dá)

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【摘要】：AAV-ITR單鏈DNA微載體是一種基于腺相關(guān)病毒(AAV)倒置末端重復(fù)序列(ITR)的基因表達(dá)載體(AAV-ITR ss DNA mini vector)。前期研究已證明AAV-ITR單鏈DNA微載體在HEK 293T細(xì)胞中具有較高的轉(zhuǎn)染、表達(dá)效率。本文中將相同拷貝數(shù)的AAV-ITR單鏈DNA微載體、3?-ITR末端錯(cuò)配的AAV-ITR單鏈DNA微載體(AAV-ITRmm ss DNA mutant vector)、AAV-ITR雙鏈DNA和質(zhì)粒分別用Turbo Fect轉(zhuǎn)入小鼠骨骼肌中,比較檢測(cè)AAV-ITR單鏈DNA微載體與其他基因表達(dá)載體在小鼠體內(nèi)1周、1個(gè)月及3個(gè)月的表達(dá)效率。組織切片經(jīng)熒光顯微鏡觀察及熒光灰度值分析表明,相同分子摩爾數(shù)的AAV-ITR單鏈DNA微載體比AAV-ITR雙鏈DNA和質(zhì)粒在不同時(shí)期表達(dá)效率都要高且更穩(wěn)定。提取注射3個(gè)月后的肌肉組織的DNA,用熒光定量PCR分析比較各載體的存留分子數(shù)。RT-PCR的結(jié)果顯示AAV-ITR單鏈DNA微載體在注射3個(gè)月后的存留分子數(shù)較其他載體高。綜合結(jié)果顯示AAV-ITR單鏈DNA微載體在動(dòng)物體內(nèi)具有表達(dá)效率高和長(zhǎng)久穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì),有可能開(kāi)發(fā)為基因治療的一種高效、穩(wěn)定的新型載體。
【作者單位】： 中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所蘇州市分子診斷和治療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 腺相關(guān)病毒(AAV) 倒置末端重復(fù)序列(ITR) 基因表達(dá)微載體 體內(nèi)表達(dá) RT-PCR 基因治療
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81371670) 江蘇省自然科學(xué)基金(No.BK2012629) 蘇州市科技局項(xiàng)目(No.ZXY2012005)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【正文快照】： 目前用于基因治療的載體主要有病毒載體(如逆轉(zhuǎn)錄病毒、痘病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒等)和非病毒載體(如質(zhì)粒載體)[1-6]。病毒載體雖然效率高但容易引起不同程度的免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng),而且還存在插入突變、致癌等風(fēng)險(xiǎn)[7-9]。一些病毒載體還有包裝基因容量的限制,如腺相關(guān)病毒(A

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本文編號(hào)：802773