發(fā)布時間：2017-09-06 11:10

  本文關鍵詞：AAV-ITR單鏈DNA微載體在小鼠骨骼肌中的表達

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【摘要】：AAV-ITR單鏈DNA微載體是一種基于腺相關病毒(AAV)倒置末端重復序列(ITR)的基因表達載體(AAV-ITR ss DNA mini vector)。前期研究已證明AAV-ITR單鏈DNA微載體在HEK 293T細胞中具有較高的轉染、表達效率。本文中將相同拷貝數(shù)的AAV-ITR單鏈DNA微載體、3?-ITR末端錯配的AAV-ITR單鏈DNA微載體(AAV-ITRmm ss DNA mutant vector)、AAV-ITR雙鏈DNA和質粒分別用Turbo Fect轉入小鼠骨骼肌中,比較檢測AAV-ITR單鏈DNA微載體與其他基因表達載體在小鼠體內(nèi)1周、1個月及3個月的表達效率。組織切片經(jīng)熒光顯微鏡觀察及熒光灰度值分析表明,相同分子摩爾數(shù)的AAV-ITR單鏈DNA微載體比AAV-ITR雙鏈DNA和質粒在不同時期表達效率都要高且更穩(wěn)定。提取注射3個月后的肌肉組織的DNA,用熒光定量PCR分析比較各載體的存留分子數(shù)。RT-PCR的結果顯示AAV-ITR單鏈DNA微載體在注射3個月后的存留分子數(shù)較其他載體高。綜合結果顯示AAV-ITR單鏈DNA微載體在動物體內(nèi)具有表達效率高和長久穩(wěn)定的優(yōu)勢,有可能開發(fā)為基因治療的一種高效、穩(wěn)定的新型載體。
【作者單位】： 中國科學院蘇州生物醫(yī)學工程技術研究所蘇州市分子診斷和治療技術重點實驗室;
【關鍵詞】： 腺相關病毒(AAV) 倒置末端重復序列(ITR) 基因表達微載體 體內(nèi)表達 RT-PCR 基因治療
【基金】：國家自然科學基金(No.81371670) 江蘇省自然科學基金(No.BK2012629) 蘇州市科技局項目(No.ZXY2012005)資助~~
【分類號】：R3416
【正文快照】： 目前用于基因治療的載體主要有病毒載體(如逆轉錄病毒、痘病毒、腺病毒、腺相關病毒等)和非病毒載體(如質粒載體)[1-6]。病毒載體雖然效率高但容易引起不同程度的免疫反應和炎癥反應,而且還存在插入突變、致癌等風險[7-9]。一些病毒載體還有包裝基因容量的限制,如腺相關病毒(A

【參考文獻】

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本文編號：802773