本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對其纖毛長度的影響

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【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs),也稱骨髓基質(zhì)來源干細(xì)胞,是存在于骨髓中的一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞,可分化為成骨細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等,參與體內(nèi)骨平衡調(diào)節(jié)和骨造血微環(huán)境構(gòu)成。腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase,AC)作為第二信使c AMP信號(hào)通路的重要組分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亞型表達(dá)種類,尚待明了。初級(jí)纖毛(Primary cilia)是一種突出于真核細(xì)胞表面的“毛發(fā)狀”細(xì)胞器,是原生生物到脊椎動(dòng)物中一種在進(jìn)化上高度保守且必不可少的細(xì)胞器,具有感測和轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)械力和化學(xué)信號(hào)并產(chǎn)生信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)等功能,對BMSCs細(xì)胞增殖與分化具有關(guān)鍵作用。AC3不僅在哺乳動(dòng)物主要嗅覺表皮組織神經(jīng)細(xì)胞的初級(jí)纖毛介導(dǎo)的嗅覺信號(hào)傳導(dǎo)過程中具有重要調(diào)節(jié)作用,還與BMSCs中的初級(jí)纖毛共表達(dá)。但AC3是否影響B(tài)MSCs中細(xì)胞纖毛長度進(jìn)而影響B(tài)MSCs的增殖與分化,尚未明確。本研究通過對小鼠BMSCs原代培養(yǎng)條件優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)在以4.0×106cell/m L的骨髓單核細(xì)胞濃度培養(yǎng),并于4d首次換液,增殖速度快,生長狀態(tài)良好。對最適培養(yǎng)條件下生長良好的的細(xì)胞,提取其總RNA并反轉(zhuǎn)錄;采用RT-PCR和序列比對分析,確定了在原代小鼠BMSCs中有6種AC亞型表達(dá),分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9;分別對野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(WT-BMSCs)和AC3基因敲除型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MUT-BMSCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)、饑餓誘導(dǎo)和Li Cl刺激,利用細(xì)胞免疫熒光染色對初級(jí)纖毛進(jìn)行亞定位及長度統(tǒng)計(jì)分析。相同體外培養(yǎng)條件下,相較于WT-BMSCs細(xì)胞,MUT-BMSCs細(xì)胞增殖速度相對較慢;同時(shí),體外誘導(dǎo)條件下,WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長度最長為8.96μm,MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長度最長為5.61μm,MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長度明顯短于WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長度。本研究明確了原代小鼠BMSCs中AC亞型表達(dá)種類分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9,并首次發(fā)現(xiàn)小鼠AC3基因缺失可導(dǎo)致其BMSCs纖毛長度變短。
【關(guān)鍵詞】：腺苷酸環(huán)化酶 初級(jí)纖毛 纖毛長度 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 第1章 文獻(xiàn)綜述13-26
• 1．1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞13-17
• 1．1．1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡介13-14
• 1．1．2 BMSCs的增殖與分化能力14-17
• 1．2 初級(jí)纖毛17-19
• 1．2．1 初級(jí)纖毛簡介17-19
• 1．2．2 初級(jí)纖毛在骨形成中的作用19
• 1．3 腺苷酸環(huán)化酶19-24
• 1．3．1 腺苷酸環(huán)化酶簡介19-21
• 1．3．2 AC的分類及特性21-23
• 1．3．3 AC3 簡介23-24
• 1．4 本研究的目的和意義24-26
• 第2章 小鼠BMSCS中的AC基因家族表達(dá)26-34
• 2．1 前言26
• 2．2 試劑和溶液26-27
• 2．3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27
• 2．4 方法27-30
• 2．4．1 體外分離培養(yǎng)原代小鼠BMSCs27-28
• 2．4．2 細(xì)胞免疫熒光染色分析28
• 2．4．3 細(xì)胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄28
• 2．4．4 RT-PCR28-30
• 2．4．5 核苷酸序列分析30
• 2．5 結(jié)果30-32
• 2．5．1 體外原代培養(yǎng)小鼠BMSCs30
• 2．5．2 特異性抗體檢測原代小鼠BMSCs純度30-31
• 2．5．3 小鼠BMSCs中AC表達(dá)種類31-32
• 2．6 討論32-34
• 第3章 小鼠BMSCS中腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ對初級(jí)纖毛長度的影響34-50
• 3．1 前言34
• 3．2 相關(guān)儀器、試劑及實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 3．2．1 部分相關(guān)溶液及配置34-35
• 3．2．2 實(shí)驗(yàn)材料35
• 3．3 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 3．3．1 小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞中初級(jí)纖毛的誘導(dǎo)35
• 3．3．2 免疫熒光染色鑒定及測量纖毛長度35
• 3．3．3 纖毛長度統(tǒng)計(jì)及分析35-36
• 3．4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-48
• 3．4．1 AC3 對BMSCs細(xì)胞生長的影響36
• 3．4．2 WT-BMSCs初級(jí)纖毛長度體外誘導(dǎo)36-42
• 3．4．3 MUT-BMSCs初級(jí)纖毛長度體外誘導(dǎo)42-47
• 3．4．4 AC3 對小鼠BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長度的影響47-48
• 3．5 討論48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 致謝59-60
• 讀研期間發(fā)表的論文60

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