本文關鍵詞：小鼠骨髓間充質干細胞中AC基因亞型的表達及AC3對其纖毛長度的影響

  更多相關文章： 腺苷酸環(huán)化酶 初級纖毛 纖毛長度 骨髓間充質干細胞(BMSCs)

【摘要】：骨髓間充質干細胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs),也稱骨髓基質來源干細胞,是存在于骨髓中的一類具有多向分化潛能的干細胞,可分化為成骨細胞、骨骼肌細胞及脂肪細胞等,參與體內骨平衡調節(jié)和骨造血微環(huán)境構成。腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase,AC)作為第二信使c AMP信號通路的重要組分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亞型表達種類,尚待明了。初級纖毛(Primary cilia)是一種突出于真核細胞表面的“毛發(fā)狀”細胞器,是原生生物到脊椎動物中一種在進化上高度保守且必不可少的細胞器,具有感測和轉導機械力和化學信號并產生信號級聯反應等功能,對BMSCs細胞增殖與分化具有關鍵作用。AC3不僅在哺乳動物主要嗅覺表皮組織神經細胞的初級纖毛介導的嗅覺信號傳導過程中具有重要調節(jié)作用,還與BMSCs中的初級纖毛共表達。但AC3是否影響B(tài)MSCs中細胞纖毛長度進而影響B(tài)MSCs的增殖與分化,尚未明確。本研究通過對小鼠BMSCs原代培養(yǎng)條件優(yōu)化,發(fā)現小鼠BMSCs原代培養(yǎng)在以4.0×106cell/m L的骨髓單核細胞濃度培養(yǎng),并于4d首次換液,增殖速度快,生長狀態(tài)良好。對最適培養(yǎng)條件下生長良好的的細胞,提取其總RNA并反轉錄;采用RT-PCR和序列比對分析,確定了在原代小鼠BMSCs中有6種AC亞型表達,分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9;分別對野生型小鼠骨髓間充質干細胞(WT-BMSCs)和AC3基因敲除型小鼠骨髓間充質干細胞(MUT-BMSCs)進行體外培養(yǎng)、饑餓誘導和Li Cl刺激,利用細胞免疫熒光染色對初級纖毛進行亞定位及長度統(tǒng)計分析。相同體外培養(yǎng)條件下,相較于WT-BMSCs細胞,MUT-BMSCs細胞增殖速度相對較慢;同時,體外誘導條件下,WT-BMSCs細胞初級纖毛長度最長為8.96μm,MUT-BMSCs細胞初級纖毛長度最長為5.61μm,MUT-BMSCs細胞初級纖毛長度明顯短于WT-BMSCs細胞初級纖毛長度。本研究明確了原代小鼠BMSCs中AC亞型表達種類分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9,并首次發(fā)現小鼠AC3基因缺失可導致其BMSCs纖毛長度變短。
【關鍵詞】：腺苷酸環(huán)化酶 初級纖毛 纖毛長度 骨髓間充質干細胞(BMSCs)
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 第1章 文獻綜述13-26
• 1．1 骨髓間充質干細胞13-17
• 1．1．1 骨髓間充質干細胞簡介13-14
• 1．1．2 BMSCs的增殖與分化能力14-17
• 1．2 初級纖毛17-19
• 1．2．1 初級纖毛簡介17-19
• 1．2．2 初級纖毛在骨形成中的作用19
• 1．3 腺苷酸環(huán)化酶19-24
• 1．3．1 腺苷酸環(huán)化酶簡介19-21
• 1．3．2 AC的分類及特性21-23
• 1．3．3 AC3 簡介23-24
• 1．4 本研究的目的和意義24-26
• 第2章 小鼠BMSCS中的AC基因家族表達26-34
• 2．1 前言26
• 2．2 試劑和溶液26-27
• 2．3 實驗動物27
• 2．4 方法27-30
• 2．4．1 體外分離培養(yǎng)原代小鼠BMSCs27-28
• 2．4．2 細胞免疫熒光染色分析28
• 2．4．3 細胞總RNA提取及反轉錄28
• 2．4．4 RT-PCR28-30
• 2．4．5 核苷酸序列分析30
• 2．5 結果30-32
• 2．5．1 體外原代培養(yǎng)小鼠BMSCs30
• 2．5．2 特異性抗體檢測原代小鼠BMSCs純度30-31
• 2．5．3 小鼠BMSCs中AC表達種類31-32
• 2．6 討論32-34
• 第3章 小鼠BMSCS中腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ對初級纖毛長度的影響34-50
• 3．1 前言34
• 3．2 相關儀器、試劑及實驗材料34-35
• 3．2．1 部分相關溶液及配置34-35
• 3．2．2 實驗材料35
• 3．3 實驗方法35-36
• 3．3．1 小鼠骨髓間充質細胞中初級纖毛的誘導35
• 3．3．2 免疫熒光染色鑒定及測量纖毛長度35
• 3．3．3 纖毛長度統(tǒng)計及分析35-36
• 3．4 實驗結果36-48
• 3．4．1 AC3 對BMSCs細胞生長的影響36
• 3．4．2 WT-BMSCs初級纖毛長度體外誘導36-42
• 3．4．3 MUT-BMSCs初級纖毛長度體外誘導42-47
• 3．4．4 AC3 對小鼠BMSCs細胞初級纖毛長度的影響47-48
• 3．5 討論48-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-59
• 致謝59-60
• 讀研期間發(fā)表的論文60

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