本文關(guān)鍵詞：二硫鍵穩(wěn)定的人源性抗bFGF雙鏈抗體的酵母表達(dá)及鑒定

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【摘要】：目的為提高小分子抗體表達(dá)量,利用酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)二硫鍵穩(wěn)定的人源性抗bFGF雙鏈抗體(ds-Diabody)并研究其生物學(xué)活性。方法將ds-Diabody基因構(gòu)建到酵母表達(dá)載體中獲得重組質(zhì)粒pPICZαA-ds-Diabody,經(jīng)BglⅡ線性化電轉(zhuǎn)至畢赤酵母GS115中,甲醇誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及Western blot鑒定,并進(jìn)行鎳離子親和層析和陰離子交換層析純化。間接ELISA檢測其抗原結(jié)合活性,CCK8法和劃痕實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其腫瘤抑制作用。結(jié)果成功構(gòu)建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表達(dá)載體,并獲得4株高表達(dá)酵母工程菌,經(jīng)1%甲醇誘導(dǎo)96 h表達(dá)量即可恒定,表達(dá)量可達(dá)158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot結(jié)果顯示,目的蛋白大小約Mr35 000左右。通過兩步純化方案,目的蛋白的純度可達(dá)95%以上。ELISA結(jié)果顯示純化的ds-Diabody可與bFGF特異性結(jié)合。CCK8結(jié)果顯示,純化的ds-Diabody可劑量依賴性地抑制人肺癌細(xì)胞株A549的增殖,最大抑制率為43.4%。劃痕實(shí)驗(yàn)表明ds-Diabody可以抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。結(jié)論研究結(jié)果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在畢赤酵母中可獲得高效表達(dá),且具有很好的生物學(xué)活性。
【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;暨南大學(xué)抗體工程研究中心廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： bFGF ds-Diabody 畢赤酵母 肺癌細(xì)胞
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(21612112) 國家自然科學(xué)基金(81372281) 國家863項(xiàng)目(2009AA02Z112)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 血管生長因子可以通過刺激腫瘤血管新生來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長、增殖及遷移等[1]。多種腫瘤組織高表達(dá)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其受體[2-3]。近年臨床研究發(fā)現(xiàn),癌癥患者長期

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：774506