本文關(guān)鍵詞：組織工程學黃韌帶干細胞的篩選與鑒定

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【摘要】：目的:通過Fibronectin介導(dǎo)進行差別粘附法篩選出人黃韌帶干細胞并進行鑒定,探討其作為組織工程種子細胞的可行性。方法:從椎間孔鏡或椎間盤鏡微創(chuàng)手術(shù)中獲取10例人黃韌帶標本,機械-酶消化法聯(lián)合獲取原代細胞,擴增第二代后接種于Fibronectin包被過的培養(yǎng)瓶。流式細胞儀檢測細胞表面特異性標志物。免疫組化方法測定干細胞表達相關(guān)特異性蛋白。使用干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基(實驗組)向成骨、成脂、成軟骨多向誘導(dǎo)分化,使用常規(guī)生長培養(yǎng)基培養(yǎng)者作為陰性對照(對照組),分別行茜素紅染色、油紅O染色、阿利辛蘭染色鑒定。PT-PCR檢測成骨、成脂肪、成軟骨基因表達。取同一患者的髂骨骨髓提取骨髓間充質(zhì)干細胞,統(tǒng)計學分析黃韌帶干細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞周期、增殖能力和干性基因表達差異。結(jié)果:原代細胞形態(tài)呈三角形或多角形,經(jīng)Fibronectin介導(dǎo)粘附培養(yǎng)后形態(tài)比較均一,呈長梭形克隆群。流式細胞儀檢測篩選后的黃韌帶干細胞CD90、CD73陽性率96.8%,CD105陽性率95.9%,而stro-1為陰性。實驗組茜素紅染色呈強陽性,油紅O染色可見大小不等脂滴呈紅色,阿利辛蘭染色大量蛋白聚糖聚集呈藍色,對照組均為陰性。PT-PCR測定實驗組成骨基因(OC、ALP、RUNX-2)、成脂肪基因(LPL、APP、PPAR2)、成軟骨基因(COLⅡ、AGG、SOX9)顯著上調(diào),其中RUNX-2在對照組有低水平表達。免疫組化顯示黃韌帶干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞均表達a-SMA、Ⅰ型膠原、纖連蛋白,但均不表達Ⅱ型膠原。兩種干細胞均超過80%的細胞比例處于G0/G1期提示都有很強自我更新能力(P0.05)。CCK-8檢測不同時間點兩種細胞的增殖能力,在第1~10天時OD值逐漸增加,第10~14天達穩(wěn)定狀態(tài),二者有相似的增殖能力(P0.05)。兩種干細胞均表達干性基因NONAG、OCT-4、SOX2,組間差異無顯著性(P0.05)。結(jié)論:通過Fibronectin差別粘附篩選法可有效篩選純化出黃韌帶干細胞,其可向成骨、成脂、成軟骨多向分化,為組織工程技術(shù)治療退變椎間盤提供了新的種子細胞。
【作者單位】： 解放軍第三軍醫(yī)大學附屬新橋醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： 人 黃韌帶干細胞 骨髓間充質(zhì)干細胞 髓核 Fibronectin差別粘附法 組織工程
【分類號】：R329.2
【正文快照】： Chongqing,China腰痛主病因是腰椎間盤退變[1],退變本質(zhì)是盤內(nèi)有核細胞數(shù)量減少和功能降低,包括細胞衰老[2、3]、凋亡[4、5]、細胞外基質(zhì)(Ⅱ型膠原、蛋白聚糖、含水量)減少、合成代謝和分解代謝失衡、軟骨終板退變導(dǎo)致營養(yǎng)供應(yīng)的減少等改變,形成腰椎間盤突出、椎管狹窄、脊柱

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本文編號：752259