本文關(guān)鍵詞：新型陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物可作為反義寡核苷酸基因的運(yùn)輸載體

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【摘要】：背景:病毒類基因載體雖然具有較高的轉(zhuǎn)染效率,其安全性一直受到人們的質(zhì)疑。目的:以陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物作為基因藥物運(yùn)輸?shù)妮d體,研究其對(duì)人類c-myc反義寡核苷酸(AS-ODN)的負(fù)載和運(yùn)輸能力,并對(duì)其安全性和有效性進(jìn)行評(píng)價(jià),方法:應(yīng)用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法合成具有高度生物相容性的雙嵌段磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70,并對(duì)其溶液進(jìn)行表征。用DNA凝膠電泳法對(duì)MPC30-DEA70與針對(duì)AS-ODN生成不同N/P比值的基因復(fù)合物進(jìn)行表征。將MPC30-DEA70/AS-OD基因復(fù)合物轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞,檢測(cè)其細(xì)胞相容性、轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。結(jié)果與結(jié)論:MPC30-DEA70在pH=4.0-11.0范圍內(nèi)的0.01 mol/L PBS中顯示出高度水溶性,其正電性隨pH值降低而增強(qiáng)。MPC30-DEA70/AS-ODN基因復(fù)合物在DNA凝膠電泳中顯示出不同程度的電泳遲滯,隨電性增強(qiáng)而顯著。MTT法檢測(cè)顯示MPC30-DEA70對(duì)HEK293細(xì)胞株的毒性呈劑量依賴性,高濃度下細(xì)胞毒性顯著增強(qiáng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)復(fù)合物的轉(zhuǎn)染隨N/P比值增加而顯著增強(qiáng);共聚焦顯微鏡觀察到AS-ODN分子在細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn),提示其有效的核定位。證實(shí)新型陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物可以有效負(fù)載和運(yùn)輸反義寡核苷酸,是一種高效安全的非病毒類轉(zhuǎn)基因載體。
【作者單位】： 徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科;中國(guó)礦業(yè)大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 基因療法 遺傳載體 寡核苷酸 反義 陽(yáng)離子 聚合物 組織構(gòu)建 組織工程 磷酸膽堿聚合物 反義寡核苷酸 基因運(yùn)輸 非病毒載體 基因治療 國(guó)家自然科學(xué)基金
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30800219,30670557) 江蘇省高校自然科學(xué)基金(08KJD320013) 徐州醫(yī)學(xué)院院長(zhǎng)專項(xiàng)人才基金(07KJZ26)資助~~
【分類號(hào)】：R373;R3416
【正文快照】： 0引言Introduction方法:近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)和理論的發(fā)展,人們逐陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物的合成制備及表征:參照文漸認(rèn)識(shí)到許多疾病都是由基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)異常而引起獻(xiàn)[5-6],應(yīng)用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法(atom transfer的�；蛑委熅褪菓�(yīng)用基因工程和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),將radic

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