本文關鍵詞：新型陽離子磷酸膽堿聚合物可作為反義寡核苷酸基因的運輸載體

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【摘要】：背景:病毒類基因載體雖然具有較高的轉染效率,其安全性一直受到人們的質疑。目的:以陽離子磷酸膽堿聚合物作為基因藥物運輸的載體,研究其對人類c-myc反義寡核苷酸(AS-ODN)的負載和運輸能力,并對其安全性和有效性進行評價,方法:應用原子轉移自由基聚合法合成具有高度生物相容性的雙嵌段磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70,并對其溶液進行表征。用DNA凝膠電泳法對MPC30-DEA70與針對AS-ODN生成不同N/P比值的基因復合物進行表征。將MPC30-DEA70/AS-OD基因復合物轉染至體外培養(yǎng)的HEK293細胞,檢測其細胞相容性、轉染效率和細胞內轉運機制。結果與結論:MPC30-DEA70在pH=4.0-11.0范圍內的0.01 mol/L PBS中顯示出高度水溶性,其正電性隨pH值降低而增強。MPC30-DEA70/AS-ODN基因復合物在DNA凝膠電泳中顯示出不同程度的電泳遲滯,隨電性增強而顯著。MTT法檢測顯示MPC30-DEA70對HEK293細胞株的毒性呈劑量依賴性,高濃度下細胞毒性顯著增強。流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)復合物的轉染隨N/P比值增加而顯著增強;共聚焦顯微鏡觀察到AS-ODN分子在細胞核內的轉運,提示其有效的核定位。證實新型陽離子磷酸膽堿聚合物可以有效負載和運輸反義寡核苷酸,是一種高效安全的非病毒類轉基因載體。
【作者單位】： 徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院心內科;中國礦業(yè)大學材料科學與工程學院;
【關鍵詞】： 基因療法 遺傳載體 寡核苷酸 反義 陽離子 聚合物 組織構建 組織工程 磷酸膽堿聚合物 反義寡核苷酸 基因運輸 非病毒載體 基因治療 國家自然科學基金
【基金】：國家自然科學基金(30800219,30670557) 江蘇省高校自然科學基金(08KJD320013) 徐州醫(yī)學院院長專項人才基金(07KJZ26)資助~~
【分類號】：R373;R3416
【正文快照】： 0引言Introduction方法:近年來隨著分子生物學技術和理論的發(fā)展,人們逐陽離子磷酸膽堿聚合物的合成制備及表征:參照文漸認識到許多疾病都是由基因的結構和表達異常而引起獻[5-6],應用原子轉移自由基聚合法(atom transfer的�；蛑委熅褪菓没蚬こ毯图毎飳W技術,將radic

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