本文關(guān)鍵詞：小鼠睪丸糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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【摘要】：N-糖基化是生物體內(nèi)最重要和最普遍的修飾方式之一,參與多種生物進(jìn)程包括蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)定位。很多證據(jù)表明糖基化在精子發(fā)生以及受精過(guò)程中起到重要作用,但我們對(duì)糖基化修飾蛋白的組成和生物結(jié)構(gòu)知道的很少。睪丸作為一個(gè)重要的生殖內(nèi)分泌器官,主要產(chǎn)生精子和分泌雄激素。睪丸結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及其在男性生殖系統(tǒng)中的重要作用都表明了其在研究男性生育方面至關(guān)重要的影響力。而在另一方面,蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)廣泛地應(yīng)用于組織和細(xì)胞水平整體蛋白質(zhì)的定性和定量研究；而近年來(lái)馬普實(shí)驗(yàn)室利用凝集素來(lái)富集糖基化蛋白后,再使用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定,同時(shí)利用重水環(huán)境對(duì)糖肽段進(jìn)行凝集素酶切,使蛋白質(zhì)組學(xué)能夠用于系統(tǒng)而全面地解析樣本中糖蛋白的具體修飾位點(diǎn)。目前,尚未有小鼠睪丸組織糖基化修飾譜系報(bào)道,因此本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和糖肽富集技術(shù)構(gòu)建小鼠睪丸N-糖基化蛋白質(zhì)譜系,共鑒定到了1463個(gè)糖基化位點(diǎn),分布于740種N-糖基化蛋白質(zhì)。我們通過(guò)生物信息學(xué)方法系統(tǒng)闡釋這些修飾位點(diǎn)的序列特征、對(duì)應(yīng)修飾蛋白主要參與的功能和調(diào)控通路。我們發(fā)現(xiàn)除鑒定的NXS和NXT基序外,在睪丸中最為富集的基序?yàn)镹CX。GO和KEGG功能富集分析揭示了這些蛋白主要定位在細(xì)胞膜、溶酶體和高爾基體等部位,具有水解酶和肽酶等活性,主要參與細(xì)胞黏附、蛋白質(zhì)水解和定位等事件。最后,我們進(jìn)一步挑選了部分非分泌型的睪丸特異性的糖基化蛋白進(jìn)行詳細(xì)分析,構(gòu)建了復(fù)雜交互作用和基因功能調(diào)控網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)這些糖蛋白與精子發(fā)生等過(guò)程密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)為研究糖蛋白在精子發(fā)生過(guò)程中作用的分子機(jī)制研究提供了理論基礎(chǔ)和備選分子靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：小鼠睪丸 蛋白質(zhì)組學(xué) N端糖基化 糖基化蛋白質(zhì)譜 質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-19
• 一、實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 二、實(shí)驗(yàn)方法13-19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-29
• 一、小鼠睪丸蛋白糖基化位點(diǎn)的鑒定19-21
• 二、小鼠睪丸N-糖基化位點(diǎn)序列特征分析21-22
• 三、小鼠睪丸N-糖基化蛋白質(zhì)功能富集分析22-24
• 四、小鼠睪丸N-糖基化蛋白質(zhì)生物通路分析24-26
• 五、睪丸特異糖基化蛋白功能分析26-29
• 討論29-39
• 參考文獻(xiàn)39-46
• 文獻(xiàn)綜述46-60
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況60-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：713659