背景與目的:幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)的高感染率及其嚴(yán)重的危害性,使Hp疫苗成為當(dāng)今研究的熱點之一。隨著疫苗研究的深入,應(yīng)用混合抗原成分制備Hp疫苗將是未來Hp疫苗研究的趨勢。細(xì)胞內(nèi)感染性細(xì)菌減毒后作為DNA疫苗載體是目前基因疫苗研究的熱點之一。沙門氏菌(Salmonella typhimurium)是一種較為常見的侵襲性胞內(nèi)菌,通過基因工程方法減毒后對宿主致病性顯著降低,但仍保留良好的侵襲力,可直接將表達(dá)質(zhì)粒攜帶進(jìn)入動物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的蛋白而誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答反應(yīng)。但由于其質(zhì)粒中含有抗生素抗性基因,盡管其在體外試驗有效,在人體內(nèi)卻無法應(yīng)用,Nakayama等構(gòu)建的平衡致死系統(tǒng)解決了這一問題。本課題擬構(gòu)建幽門螺桿菌BabA2/UreI融合基因雙價DNA疫苗,首先通過基因工程技術(shù)構(gòu)建含asd基因的重組原核表達(dá)質(zhì)粒,并利用沙門氏菌asd平衡致死系統(tǒng),最終獲得表達(dá)重組人BabA2/UreI融合基因蛋白的重組沙門菌減毒疫苗株x8501(pYA3342/BabA2/UreI),并檢測目的蛋白的表達(dá)和抗原性,為制備預(yù)防Hp感染的DNA疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法:①Ba...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1pYA3342的物理圖譜

2.2.1.2質(zhì)粒表達(dá)質(zhì)粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠贈，其物理圖譜見圖2已構(gòu)建好的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院化病研究所制備[27,28]，其物理圖譜見圖2.2；載體pC....

圖2.2pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI的物理圖譜

2.2.1.2質(zhì)粒表達(dá)質(zhì)粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠贈，其物理圖譜見圖2已構(gòu)建好的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院化病研究所制備[27,28]，其物理圖譜見圖2.2；載體pC....

圖2.4重組質(zhì)粒pYA3342lBabA2/tJreI構(gòu)建示意圖

圖2.5PCR擴(kuò)增BabA2/UreI融合基因

圖2.5PCR擴(kuò)增BabA2/UreI融合基因圖2.6酶切pCF-T/BabA2/UreI融合質(zhì)粒A：DNAMarkerA：DNAMarkerB：PCR擴(kuò)增BabA2/UreI融合基因產(chǎn)物B：SmaI和SalI分步進(jìn)行雙酶切的結(jié)果2.3.1.2pCF-....

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