本文關(guān)鍵詞：EGCG誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡及調(diào)節(jié)APP分解代謝的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 表觀遺傳學(xué) 腫瘤 阿爾茨海默病 凋亡 淀粉樣前體蛋白 HDAC1 肝癌

【摘要】：目的：表觀遺傳學(xué)是指在DNA序列沒有發(fā)生改變的情況下,生物體的基因的表型發(fā)生變化,同時(shí)這種基因表型的改變可以在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的過程當(dāng)中發(fā)生穩(wěn)定遺傳。表觀遺傳學(xué)主要包括DNA以及與其密切相關(guān)的蛋白,非編碼RNA等,能夠在基因表達(dá)的過程中的多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用,例如DNA的甲基化、組蛋白的修飾作用、染色質(zhì)的重塑、遺傳印記以及RNA的表達(dá)水平。目前,越來越多的研究表明,表觀遺傳學(xué)可能貫穿疾病發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過程的始終,尤其是在阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease, AD)與腫瘤這兩種疾病中,也有研究表明導(dǎo)致AD發(fā)生的關(guān)鍵蛋白—淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)在腫瘤中也呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),這種基因的高表達(dá)可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。那么是不是也就意味著通過抑制APP在兩種疾病中的高表達(dá)狀態(tài)就可以尋找出同時(shí)治療兩種疾病的突破口呢?表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是茶葉中含量極高的重要的一種兒茶素類化合物,目前研究數(shù)據(jù)表明EGCG具有對(duì)抗腫瘤,調(diào)理內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng),抗突變以及預(yù)防和治療心腦血管疾病等作用。EGCG能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,減少腫瘤中HDAC1的表達(dá),同時(shí)能夠顯著降低AD腦內(nèi)與腫瘤中APP的含量,同時(shí)激活A(yù)D腦內(nèi)A β的清除機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以PC12細(xì)胞為模型著重研究EGCG誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞促凋亡的作用及表觀遺傳學(xué)機(jī)制,探討APP與HDAC1之間的作用關(guān)系,以及EGCG對(duì)APP分解代謝途徑的調(diào)控作用；同時(shí)我們通過檢測(cè)人的肝癌及癌旁組織的中HDAC1和APP的表達(dá)輔助驗(yàn)證HDAC1與APP的相互關(guān)系。方法：無胸腺的裸鼠,在注射PC12細(xì)胞成瘤后,隨機(jī)分成PBS組和EGCG組,從注射細(xì)胞到給藥完成時(shí)間為23天。通過Tunel染色及Westernblot檢測(cè)腫瘤抑制情況。體外實(shí)驗(yàn)我們將EGCG作用于PC12細(xì)胞上通過MTT及流式細(xì)胞術(shù)來檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,用Westernblot來檢測(cè)APP, HDAC1, Casepase家族,Bc1-2, Bax的變化情況,分析EGCG促凋亡的機(jī)制,之后通過檢測(cè)sAPP a, sAPP β, αa-scretase,β-secretase, r-secretase, AICD, Aβ的蛋白含量變化來說明EGCG對(duì)腫瘤內(nèi)APP分解代謝途徑的影響。應(yīng)用免疫組化檢測(cè)人的肝癌及癌旁組織中APP及HDAC1的表達(dá)。結(jié)果：1.EGCG能夠抑制異位種植瘤的生長(zhǎng)：腹腔注射EGCG組的裸鼠腫瘤明顯小于PBS組的腫瘤,抑制率達(dá)53%(P0.01,n=8)。2.EGCG具有促凋亡作用：通過Tunel染色,我們發(fā)現(xiàn)EGCG的促凋亡作用明顯高于PBS。同樣,EGCG作用在PC12細(xì)胞上48h,72h后,經(jīng)MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞存活率呈梯度下降,且72h的存活率要低于48h。3. EGCG促凋亡機(jī)制通路：EGCG促進(jìn)腫瘤凋亡可能與其下調(diào)Bcl-2、提高Bax的表達(dá)有關(guān),同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)EGCG能夠促進(jìn)Casepase-3和Casepase-7的切割,降低HDAC1的表達(dá),這也與腫瘤凋亡的機(jī)制密不可分。4. EGCG對(duì)APP分解代謝途徑的影響：腫瘤組織與細(xì)胞中APP呈高表達(dá)狀態(tài),同時(shí)EGCG能夠下調(diào)腫瘤細(xì)胞中sAPPα, sAPPβ, α-scretase,β-secretase, γ-secretase, Aβ的表達(dá),但AICD的含量無明顯變化,且高劑量有上調(diào)趨勢(shì)。5.肝癌組織中APP, HDAC1的表達(dá)高于癌旁組織,但兩者并未出現(xiàn)相關(guān)性,同時(shí)與肝癌分期的統(tǒng)計(jì)中也并未出現(xiàn)相關(guān)性。結(jié)論：EGCG能夠抑制腫瘤的增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)APP分解代謝途徑,降低APP mRNA的表達(dá),下調(diào)APP的蛋白表達(dá),同時(shí)EGCG被證明是HDAC1的抑制劑,通過調(diào)控HDAC1的表達(dá),同時(shí)下調(diào)APP介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。肝癌組織中APP與HDAC1的表達(dá)高于癌旁組織。
【關(guān)鍵詞】：表觀遺傳學(xué) 腫瘤 阿爾茨海默病 凋亡 淀粉樣前體蛋白 HDAC1 肝癌
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R394
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文獻(xiàn)研究12-20
• 第一節(jié) 表觀遺傳學(xué)的研究現(xiàn)狀12-13
• 一、表觀遺傳學(xué)12
• 二、表觀遺傳學(xué)的內(nèi)容12-13
• 第二節(jié) 表觀遺傳學(xué)與阿爾茨海默病13-15
• 一、阿爾茨海默病的研究現(xiàn)狀13
• 二、AD的表觀遺傳學(xué)的機(jī)制13-14
• 三、AD的表觀遺傳學(xué)的治療14-15
• 第三節(jié) 表觀遺傳學(xué)與腫瘤15-16
• 一、表觀遺傳學(xué)與腫瘤的研究現(xiàn)狀15
• 二、腫瘤的表觀遺傳學(xué)與治療15-16
• 第四節(jié) 凋亡相關(guān)基因16-18
• 一、Bc1-2家族16
• 二、Casepase家族16-18
• 第五節(jié) 表沒食子兒茶素沒食子酸酯的研究應(yīng)用18
• 第六節(jié) APP分解代謝途徑18-20
• 第二章 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)20-33
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-26
• 一、動(dòng)物及標(biāo)本來源20
• 二、細(xì)胞株20
• 三、主要試劑20
• 四、儀器及耗材20
• 五、動(dòng)物建模及分組20-25
• 八、圖像采集及分析25-26
• 第二節(jié) EGCG對(duì)異位種植瘤的作用26-28
• 一、EGCG抑制異種植腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)26
• 二、EGCG對(duì)體內(nèi)增殖、凋亡的影響26-27
• 三、討論27-28
• 四、結(jié)論28
• 第三節(jié) EGCG對(duì)腫瘤組織中HDAC1與APP表達(dá)的影響28-33
• 一、EGCG對(duì)體內(nèi)乙�；降挠绊�28-29
• 二、EGCG對(duì)腫瘤組織中APP表達(dá)的影響29-31
• 三、討論31-32
• 四、結(jié)論32-33
• 第三章 體外實(shí)驗(yàn)33-45
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法33-37
• 一、細(xì)胞株33
• 二、主要藥物及試劑33
• 三、主要儀器33
• 四、溶液配制33
• 五、不同藥物濃度配制33
• 六、其他試劑配制33-34
• 七、PC12細(xì)胞復(fù)蘇34
• 八、細(xì)胞處理34-35
• 九、蛋白質(zhì)電泳35-37
• 十、封閉與抗體雜交37
• 十一、ECL化學(xué)發(fā)光及圖像處理37
• 十二、Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡的檢測(cè)37
• 第二節(jié) EGCG對(duì)PC12細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制37-41
• 一、EGCG對(duì)PC12細(xì)胞增殖凋亡的影響37-39
• 二、EGCG對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)凋亡因子的影響39-40
• 三、討論40-41
• 第三節(jié) EGCG對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)HDAC1,APP表達(dá)的影響41-45
• 一、EGCG對(duì)HDAC1和APP的影響41-42
• 二、EGCG作為HDAC1的抑制劑對(duì)APP的調(diào)控以及對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響42-43
• 三、討論43-44
• 四、結(jié)論44-45
• 第四章 EGCG對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)APP分解代謝的影響45-55
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法45-49
• 一、細(xì)胞株45
• 二、主要藥物及試劑45
• 三、儀器及耗材45
• 四、細(xì)胞培養(yǎng)溶液配制45
• 五、不同藥物濃度配制45
• 六、細(xì)胞處理及蛋白濃度測(cè)定45-46
• 七、蛋白質(zhì)電泳、轉(zhuǎn)膜46
• 八、封閉及抗體雜交46
• 九、丙酮濃縮上清蛋白法46
• 十、PCR檢測(cè)APP mRNA水平的變化46-48
• 十一、PC12細(xì)胞總RNA的提取48-49
• 第二節(jié) EGCG對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)APP分解代謝途徑的影響49-55
• 一、不同劑量EGCG對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)APP的影響49-50
• 二、不同劑量的EGCG對(duì)APP分解代謝酶的影響50-53
• 三、討論53-54
• 四、結(jié)論54-55
• 第五章 肝癌組織及癌旁組織中APP與HDAC1的表達(dá)55-62
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料及方法55-56
• 一、標(biāo)本來源55
• 二、主要試劑55
• 三、標(biāo)本處理55
• 四、圖片采集及處理55-56
• 五、結(jié)果統(tǒng)計(jì)56
• 第二節(jié) 肝癌組織中APP與HDAC1的表達(dá)及相關(guān)性分析56-62
• 一、患者的基本信息56
• 二、肝癌組織與癌旁組織中APP與HDAC1的表達(dá)56-59
• 三、APP、HDAC1、肝癌分期之間的關(guān)系59
• 四、在肝癌及癌旁組織中特殊表達(dá)的標(biāo)本59-61
• 五、討論61
• 六、結(jié)論61-62
• 結(jié)語(yǔ)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 附錄69-70
• 研究生期間發(fā)表論文情況70-71
• 致謝71-72
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明72

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本文編號(hào)：590217