本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒非結(jié)構(gòu)4A蛋白編碼基因重組子的構(gòu)建及表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建流行性乙型腦炎病毒(JEV)非結(jié)構(gòu)4A(NS4A)蛋白編碼基因重組子并鑒定。方法以JEV SA14-14-2株Total RNA為模板,運(yùn)用RT-PCR方法擴(kuò)增JEV NS4A蛋白編碼基因,克隆至pMD19-T Simple載體并測(cè)序。為便于分析JEV NS4A蛋白編碼基因重組子在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá),在JEV NS4A蛋白編碼基因5'端附加FLAG序列,亞克隆至pcDNA3.1(+)載體中,構(gòu)建重組子pJNS4A并作酶切及DNA測(cè)序分析;采用脂質(zhì)體法將pJNS4A轉(zhuǎn)染中華倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞,采用免疫熒光法檢測(cè)轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中JEV NS4A蛋白分布與表達(dá)。結(jié)果重組質(zhì)粒pJNS4A經(jīng)BamHⅠ/EcoRⅠ酶切釋出的插入子在830bp左右,與JEV NS4A蛋白編碼基因和FLAG基因序列之和(834bp)相一致。JEV NS4A蛋白編碼基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞可見(jiàn)綠色熒光標(biāo)記,主要分布在胞膜。結(jié)論 pJNS4A構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)JEV NS4A蛋白。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院感染科;
【關(guān)鍵詞】： 腦炎病毒 日本 病毒蛋白質(zhì)類 NSA蛋白 CHO細(xì)胞
【基金】：遼寧省教育廳基礎(chǔ)研究計(jì)劃資助項(xiàng)目(No.05L498) 遼寧省博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目計(jì)劃(No.20131147)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 流行性乙型腦炎(Japanese encephalitis,JE)由乙腦病毒(JEV)引起,目前尚無(wú)特效的治療方法,研制基因工程疫苗是乙腦疫苗的發(fā)展方向。基于已明確的JEV各相關(guān)蛋白功能特點(diǎn)分析,與JE DNA疫苗研究有關(guān)的JEV基因組各區(qū)段的選取主要集中于prM、E以及NS1蛋白基因等,其中prM-E蛋白編碼

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 翟永貞;周言;馬力;馮國(guó)和;;殼聚糖-pJME/GM-CSF納米DNA疫苗肌注BALB/c鼠誘導(dǎo)細(xì)胞免疫效應(yīng)的研究[J];病毒學(xué)報(bào);2014年04期

2 劉曉宇;姚立紅;陳愛(ài)s，

本文編號(hào)：589600