本文關(guān)鍵詞：以水泡性口炎病毒VSV為載體的結(jié)核疫苗VSV-846的免疫作用及機制探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,結(jié)核病依然是世界范圍內(nèi)的嚴重疾病。我國的結(jié)核病疫情告急,根據(jù)2010年第五次全國結(jié)核病流行病學的調(diào)查結(jié)果顯示,我國年發(fā)病人數(shù)約為130萬,約占全球發(fā)病的14.3%。結(jié)核病疫情之所以未能獲得有效的控制,其主要原因是預(yù)防性結(jié)核病疫苗的開發(fā)緩慢以及進展不足。世界上目前唯一可用的結(jié)核疫苗BCG,因其只能保護幼兒及嬰兒,不能在成人身上起到良好的保護效果,急需對BCG進行改進或研制新的疫苗�？紤]到結(jié)核疫苗的現(xiàn)狀,新型疫苗應(yīng)該具有能夠在體內(nèi)建立長效免疫應(yīng)答的特點。水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)因其本身具備的大量優(yōu)點且在普通人群內(nèi)存在抗VSV抗體少等特點,使其成為一個理想的病毒疫苗載體。本文通過分子生物學的方法將含有結(jié)核桿菌三抗原融合基因p846及單個抗原Rv3615c,Mtb10.4,Rv2660c克隆至VSV-XN2載體,通過VSV病毒包裝系統(tǒng),將其包裝在VSV病毒中,同時我們也構(gòu)建了三個單個抗原及融合抗原TFP846的原核表達載體,并體外純化了相應(yīng)蛋白。將成功構(gòu)建的重組VSV病毒融合抗原疫苗和單抗原疫苗以滴鼻的方式對小鼠進行免疫,以BCG組作為對照組。整個檢測過程在攻毒后持續(xù)24周,檢測相應(yīng)的細胞免疫應(yīng)答,評估其在抗結(jié)核感染中的作用,并探討該保護作用的機制機理。統(tǒng)計結(jié)果表明重組病毒VSV-846疫苗誘生的細胞和體液免疫應(yīng)答、及保護作用和傳統(tǒng)疫相對單個抗原疫苗有著極其顯著的差異,在感染階段的后期(24周)與BCG免疫組相比也具有差異性,并且可以檢測到記憶性T細胞的產(chǎn)生。通過Brdu,LDH,細胞染色等一系列實驗表明,三抗原融合疫苗,彼此相互促進,使得整個疫苗較單獨抗原所制備的疫苗具有明顯的優(yōu)勢,能夠激發(fā)更強勁的T細胞應(yīng)答。并且我們也探究了VSV-846是否能夠作為一個BCG的booster來促進其保護效果,實驗結(jié)果顯示,在攻毒后的第24周,經(jīng)過VSV-846加強免疫組的細菌載量明顯低于BCG組(CFU減少了1.10 log10,P0.01),說明此方案是可行的。綜上,我們構(gòu)建的三抗原融合的病毒載體結(jié)核疫苗VSV-846免疫小鼠能引起強烈的體液和細胞免疫應(yīng)答,且以細胞免疫應(yīng)答為主,可促使效應(yīng)型記憶性T細胞的產(chǎn)生,能長期有效的抗BCG的感染,且保護效果好于單個抗原疫苗,有望成為一種能有效控制結(jié)核病復(fù)發(fā)的新型疫苗。
【關(guān)鍵詞】：重組水泡性口炎病毒 BCG 記憶性T細胞
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分 病毒疫苗VSV-846的構(gòu)建和鑒定11-22
• 材料和方法11-16
• 實驗材料11-12
• 實驗方法12-16
• 結(jié)果16-21
• 討論21-22
• 第二部分 病毒疫苗VSV-846的免疫效果及其機制探討22-39
• 材料和方法23-26
• 實驗材料23-24
• 實驗方法24-26
• 結(jié)果26-34
• 討論34-37
• 小結(jié)37-39
• 參考文獻39-43
• 綜述43-52
• 參考文獻48-52
• 附錄52-54
• 致謝54-55

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1 張明;以水泡性口炎病毒VSV為載體的結(jié)核疫苗VSV-846的免疫作用及機制探討[D];蘇州大學;2015年

  本文關(guān)鍵詞：以水泡性口炎病毒VSV為載體的結(jié)核疫苗VSV-846的免疫作用及機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：435137