本文關(guān)鍵詞：碘和鉛離子刺激性作用靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)和機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：瞬時(shí)受體電位(TRPA1)通道是鈣通透的陽離子通道TRP通道家族的一員,可被多種物理和化學(xué)刺激激活,參與多種生理和病理過程。單質(zhì)碘作為一種高效廣譜的消毒殺菌劑應(yīng)用于臨床已將近兩個(gè)世紀(jì),在預(yù)防和治療感染方面發(fā)揮了巨大作用。限制碘臨床應(yīng)用的一個(gè)主要問題是它的傷害性刺激作用,如引起粘膜、傷口的劇烈疼痛。目前發(fā)展的各種新型碘殺菌劑主要通過控釋技術(shù)降低游離碘在作用部位的濃度從而降低其刺激性。但碘傷害性刺激作用在體內(nèi)的分子靶點(diǎn)從未被發(fā)現(xiàn),其細(xì)胞、分子機(jī)制也從未得以闡明。論文通過活細(xì)胞鈣熒光成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)碘能夠特異性激活外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的TRPA1通道和內(nèi)源性表達(dá)在小鼠背根節(jié)(DRG)神經(jīng)元中TRPA1通道；將人的TRPA1通道外源性表達(dá)在爪蟾卵母細(xì)胞和HEK293細(xì)胞,運(yùn)用雙電極電壓鉗和膜片鉗技術(shù)發(fā)現(xiàn)TRPA1通道介導(dǎo)的電流也能夠被碘激活,其ECso為0.2在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平,低于臨床濃度的碘能夠在小鼠中產(chǎn)生痛覺反應(yīng)和促進(jìn)接觸性皮炎,TRPA1通道激活后,機(jī)體產(chǎn)生的下游神經(jīng)肽SP參與了碘促進(jìn)接觸性皮炎的過程。本課題首次從分子、細(xì)胞、組織和動(dòng)物水平探討碘激活TRPA1機(jī)制以及TRPA1與碘傷害性刺激作用的關(guān)系,從而為含碘藥物的進(jìn)一步發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ),同時(shí)也將促進(jìn)TRPA1受體藥理學(xué)以及病理生理作用研究。環(huán)境鉛污染嚴(yán)重危害人的健康,本研究首次發(fā)現(xiàn)鉛離子對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)上的瞬時(shí)受體電位通道TRPA1有抑制作用。通過活細(xì)胞鈣熒光成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)鉛離子能夠抑制內(nèi)源性表達(dá)在小鼠背根節(jié)(DRG)神經(jīng)元中TRPA1通道以及外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的小鼠和人的TRPA1通道；另外將人的TRPA1通道外源性表達(dá)在爪蟾卵母細(xì)胞,運(yùn)用雙電極電壓鉗發(fā)現(xiàn)TRPA1通道介導(dǎo)的電流也能夠被鉛離子抑制,其ICso為2.4μM。這些結(jié)果表明,低濃度鉛離子就能夠抑制TRPA1通道。本研究為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和研究鉛離子的神經(jīng)毒性和鉛中毒的臨床治療提供了分子水平上的依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：碘 鉛離子 TRPA1通道 DRG神經(jīng)元 電生理 接觸性皮炎
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-13
• 縮略表13-14
• 第一章 緒言14-26
• 1.1 含單質(zhì)碘藥物的現(xiàn)狀14
• 1.2 含單質(zhì)碘藥物的發(fā)展14-15
• 1.3 碘分子殺菌消毒的作用機(jī)制和對(duì)人體的傷害性刺激作用15-16
• 1.4 鉛污染現(xiàn)狀16
• 1.5 臨床鉛中毒研究16-17
• 1.6 TRPA1通道與疼痛感受17-19
• 1.7 TRPA1通道與炎癥反應(yīng)19-21
• 1.8 實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明碘激活TRPA1受體通道21
• 1.9 TRPA1是哺乳動(dòng)物的傷害性化學(xué)感受器21-26
• 第二章 碘刺激性作用靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)和機(jī)制研究26-66
• 2.1 材料與儀器26-30
• 2.1.1 細(xì)胞系26
• 2.1.2 主要試劑、藥品26-28
• 2.1.3 主要儀器28-30
• 2.2 主要溶液及配制30-34
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法34-42
• 2.3.1 TRPA1穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的培養(yǎng)和傳代34-35
• 2.3.1.1 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇34-35
• 2.3.1.2 細(xì)胞的傳代35
• 2.3.2 人和小鼠TRPA1通道基因的轉(zhuǎn)染35
• 2.3.3 細(xì)胞內(nèi)鈣熒光信號(hào)檢測35-36
• 2.3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)板的包被和細(xì)胞傳代35-36
• 2.3.3.2 細(xì)胞Fura-2染色36
• 2.3.3.3 酶標(biāo)儀檢測鈣熒光信號(hào)檢測36
• 2.3.4 定點(diǎn)突變36-37
• 2.3.4.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化克隆36
• 2.3.4.2 細(xì)菌的擴(kuò)大培養(yǎng)和質(zhì)粒的提取36-37
• 2.3.4.3 基因的定點(diǎn)突變37
• 2.3.5 電極電壓鉗記錄TRPA1通道電流37-38
• 2.3.5.1 TRPA1通道基因的RNA合成37
• 2.3.5.2 電極電壓鉗記錄通道電流37-38
• 2.3.6 膜片鉗記錄TRPA1通道全細(xì)胞電流38
• 2.3.7 DRG神經(jīng)元鈣熒光成像38-39
• 2.3.7.1 小鼠基因型鑒定39
• 2.3.7.2 小鼠DRG神經(jīng)元的原代培養(yǎng)39
• 2.3.7.3 鈣熒光成像39
• 2.3.8 小鼠痛行為測定39-40
• 2.3.9 小鼠接觸性皮炎模型的重建和實(shí)驗(yàn)40
• 2.3.10 藥物的注射方式和劑量40-41
• 2.3.10.1 小鼠痛覺反應(yīng)模型中HC030031的注射方式和劑量(按每只小鼠20 g計(jì)算)40-41
• 2.3.10.2 小鼠接觸性皮炎模型藥物注射方式和劑量(按每只小鼠20g計(jì)算)41
• 2.3.11 耳組織切片制作41-42
• 2.3.12 ELISA檢測炎性因子42
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-59
• 2.4.1 碘特異性激活TRPA1通道42-44
• 2.4.1.1 不同載體的碘制劑均可激活外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞hTRPA1通道42-43
• 2.4.1.2 碘特異性激活外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞hTRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流43-44
• 2.4.2 碘作用于TRPA1通道的機(jī)制研究44-48
• 2.4.2.1 碘激活TRPA1通道劑量效應(yīng)關(guān)系44-47
• 2.4.2.2 碘激活TRPA1的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)和分子機(jī)制47-48
• 2.4.3 碘特異性激活DRG神經(jīng)元中TRPA1通道介導(dǎo)的鈣內(nèi)流48-50
• 2.4.3.1 碘激活DRG神經(jīng)元中TRPA1通道介導(dǎo)的細(xì)胞外鈣內(nèi)流48-49
• 2.4.3.2 TRPA1~(-/-)小鼠中碘激活神經(jīng)元比例降低49-50
• 2.4.4 TRPA1通道介導(dǎo)碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生痛覺反應(yīng)50-52
• 2.4.4.1 碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生痛覺反應(yīng)50-51
• 2.4.4.2 碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的痛覺反應(yīng)可被TRPA1通道抑制劑減弱51
• 2.4.4.3 碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的痛覺反應(yīng)在TRPA1~(-/-)小鼠中明顯降低51-52
• 2.4.5 TRPA1通道介導(dǎo)碘促進(jìn)接觸性皮炎52-59
• 2.4.5.1 惡唑酮誘導(dǎo)的炎癥模型中誘導(dǎo)后炎癥反應(yīng)與誘導(dǎo)的惡唑酮濃度成正比52-53
• 2.4.5.2 碘濃度依賴性的促進(jìn)小鼠接觸性皮炎53-55
• 2.4.5.3 TRPA1通道抑制劑HC030031降低碘對(duì)遲發(fā)型炎癥的促進(jìn)作用55-56
• 2.4.5.4 SP的受體抑制劑降低碘對(duì)接觸性皮炎的促進(jìn)作用56
• 2.4.5.5 CGRP的受體抑制劑不影響碘對(duì)接觸性皮炎的促進(jìn)作用56-57
• 2.4.5.6 碘促進(jìn)小鼠接觸性皮炎在TRPA1~(-/-)小鼠作用明顯降低57-59
• 2.5 討論59-63
• 2.5.1 碘特異性激活TRPA1通道59
• 2.5.2 碘作用于TRPA1通道的機(jī)制和位點(diǎn)研究59-60
• 2.5.3 碘特異性激活DRG神經(jīng)元上TRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流60
• 2.5.4 TRPA1通道介導(dǎo)碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生痛覺反應(yīng)60-61
• 2.5.5 TRPA1通道介導(dǎo)碘促進(jìn)接觸性皮炎61-63
• 2.6 小結(jié)63-66
• 2.6.1 碘特異性激活TRPA1通道63
• 2.6.2 碘作用于TRPA1通道的機(jī)制和位點(diǎn)研究63
• 2.6.3 碘特異性激活DRG神經(jīng)元上TRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流63
• 2.6.4 TRPA1通道介導(dǎo)碘誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生痛覺反應(yīng)63-64
• 2.6.5 TRPA1通道介導(dǎo)碘促進(jìn)接觸性皮炎64-66
• 第三章 鉛離子作用靶點(diǎn)和機(jī)制的研究66-78
• 3.1 材料與儀器66-69
• 3.1.1 主要試劑、藥品66-68
• 3.1.2 主要儀器68-69
• 3.2 主要溶液及配制69-70
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法70-72
• 3.3.1 人和小鼠TRPA1通道基因的轉(zhuǎn)染70-71
• 3.3.2 細(xì)胞內(nèi)鈣熒光信號(hào)檢測71
• 3.3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)板的包被和細(xì)胞傳代71
• 3.3.2.2 細(xì)胞Fura-2染色71
• 3.3.2.3 酶標(biāo)儀檢測鈣熒光信號(hào)檢測71
• 3.3.3 雙電極電壓鉗記錄TRPA1通道電流71-72
• 3.3.3.1 TRPA1通道基因的RNA合成71-72
• 3.3.3.2 電極電壓鉗記錄通道電流72
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果72-76
• 3.4.1 鉛離子抑制外源性表達(dá)在HEK293細(xì)胞的小鼠和人TRPA1通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流72-74
• 3.4.2 鉛離子抑制TRPA1通道介導(dǎo)的電流74-75
• 3.4.3 鉛離子抑制DRG中TRPA1通道介導(dǎo)細(xì)胞外鈣內(nèi)流75-76
• 3.5 討論76-77
• 3.6 小結(jié)77-78
• 第四章 總結(jié)與展望78-80
• 致謝80-82
• 參考文獻(xiàn)82-85

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 肖小華;聚維酮碘的臨床應(yīng)用[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2005年01期

2 袁誼;魯亞平;;鉛對(duì)神經(jīng)元離子通道的影響研究進(jìn)展[J];生物學(xué)教學(xué);2009年09期

3 戴曉青,阮迪云;鉛抑制急性分離的大鼠背根神經(jīng)節(jié)慢失活鉀電流[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2002年03期

  本文關(guān)鍵詞：碘和鉛離子刺激性作用靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)和機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：414106