目的　多肽：N－乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶是合成O－糖鏈的起始酶，而目前的研究認(rèn)為，O-糖基化與分子及細(xì)胞識(shí)別、腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移以及胚胎發(fā)育等功能密切相關(guān)。鑒于國(guó)內(nèi)對(duì)O-糖基化功能的研究尚在起步階段，本文旨在獲得穩(wěn)定表達(dá)的pp-GalNAc-T2基因克隆以供進(jìn)一步研究，并在mRNA水平觀察pp-GalNAc-T2在不同人體組織中的分布，為以后的研究提供思路，方法采用Gateway克隆技術(shù)，以人腦cDNA庫(kù)為模板克隆出pp-GalNAc-T2的可溶性部分；采用RT-PCR測(cè)定六種不同人體組織中pp-GalNAc-T2的表達(dá)，結(jié)果 1、利用人工合成的一對(duì)引物，以Marathon-ReadyTM人腦cDNA庫(kù)為模板，成功地?cái)U(kuò)增到1條pp-GalNAc-T2 cDNA片段，經(jīng)pDONRTM201克隆載體克隆擴(kuò)增后抽提質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入原核表達(dá)質(zhì)粒pFASTBAC中，兩個(gè)重組質(zhì)粒均經(jīng)線性化長(zhǎng)度鑒定，或加以克隆PCR及測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)染DH5α工程菌，SDS-PAGE電泳鑒定表達(dá)產(chǎn)物的分子量與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。2、六種不同人體組織中，以胃腸道組織中pp-GalNAc-T2 mRNA表達(dá)水平較高，腦和心肌中等，而...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
引言
第一部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2的基因克隆、序列鑒定及其在大腸桿菌的表達(dá)
第二部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2在不同正常組織中的表達(dá)
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄一 中英文縮寫詞表
附錄二 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文的情況
附錄三 Gateway^TM Technology
致謝



本文編號(hào)：3912134