目的　多肽：N－乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶是合成O－糖鏈的起始酶，而目前的研究認為，O-糖基化與分子及細胞識別、腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移以及胚胎發(fā)育等功能密切相關(guān)。鑒于國內(nèi)對O-糖基化功能的研究尚在起步階段，本文旨在獲得穩(wěn)定表達的pp-GalNAc-T2基因克隆以供進一步研究，并在mRNA水平觀察pp-GalNAc-T2在不同人體組織中的分布，為以后的研究提供思路，方法采用Gateway克隆技術(shù)，以人腦cDNA庫為模板克隆出pp-GalNAc-T2的可溶性部分；采用RT-PCR測定六種不同人體組織中pp-GalNAc-T2的表達，結(jié)果 1、利用人工合成的一對引物，以Marathon-ReadyTM人腦cDNA庫為模板，成功地擴增到1條pp-GalNAc-T2 cDNA片段，經(jīng)pDONRTM201克隆載體克隆擴增后抽提質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入原核表達質(zhì)粒pFASTBAC中，兩個重組質(zhì)粒均經(jīng)線性化長度鑒定，或加以克隆PCR及測序鑒定后轉(zhuǎn)染DH5α工程菌，SDS-PAGE電泳鑒定表達產(chǎn)物的分子量與文獻報道基本相符。2、六種不同人體組織中，以胃腸道組織中pp-GalNAc-T2 mRNA表達水平較高，腦和心肌中等，而...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
引言
第一部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2的基因克隆、序列鑒定及其在大腸桿菌的表達
第二部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2在不同正常組織中的表達
小結(jié)
參考文獻
附錄一 中英文縮寫詞表
附錄二 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文的情況
附錄三 Gateway^TM Technology
致謝



本文編號：3912134