背景:在關節(jié)軟骨細胞和骨髓間充質干細胞共培養(yǎng)環(huán)境中,軟骨細胞功能活躍,增殖速度加快,骨髓間充質干細胞促進了軟骨細胞的表型維持,而且少量軟骨細胞提供的微環(huán)境能夠誘導骨髓間充質干細胞成軟骨分化,降低了軟骨分化過程中出現的肥大表型和軟骨內骨化,但是影響共培養(yǎng)系統(tǒng)中細胞增殖分化的因素和細胞間相互作用的機制尚不明確。目的:觀察軟骨細胞和骨髓間充質干細胞接觸共培養(yǎng)對細胞增殖分化的影響,進一步優(yōu)化共培養(yǎng)方式,為探討共培養(yǎng)系統(tǒng)中二者的相互作用機制提供依據。方法:分離和培養(yǎng)新西蘭兔(南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供)軟骨細胞和骨髓間充質干細胞,取第2代軟骨細胞和骨髓間充質干細胞,以1∶3的比例直接混合在24孔板進行接觸共培養(yǎng)為接觸共培養(yǎng)組,以1∶3比例分別在Transwell的上室和下室進行非接觸共培養(yǎng)為非接觸共培養(yǎng)組,共培養(yǎng)21d。細胞爬片進行甲苯胺藍染色、COL2a1及Cx43細胞免疫化學染色。應用CCK8檢測共培養(yǎng)系統(tǒng)中細胞的增殖情況,ELISA檢測共培養(yǎng)細胞上清液中糖胺聚糖和轉化生長因子β3水平,Western blot檢測共培養(yǎng)細胞COL2a1和Cx43的表達。然后添加轉化生長因子β3進行軟骨細胞...

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文題釋義:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設計
    1.2 時間及地點
    1.3 材料
        1.3.1 實驗動物
        1.3.2 實驗試劑與儀器
    1.4 實驗方法
        1.4.1 BMSCs和ACs的分離培養(yǎng)和共培養(yǎng)
        1.4.2 ACs和BMSCs接觸共培養(yǎng)和非接觸共培養(yǎng)
        1.4.3 添加轉化生長因子β3進行BMSCs和ACs接觸共培養(yǎng)和非接觸共培養(yǎng)
    1.5 主要觀察指標
        1.5.1 共培養(yǎng)后細胞形態(tài)學變化以及免疫化學染色檢測共培養(yǎng)細胞COL2a1和Cx43的表達
        1.5.2 CCK8試劑盒檢測共培養(yǎng)細胞的增殖情況
        1.5.3 ELISA法測定共培養(yǎng)系統(tǒng)中糖胺多糖和轉化生長因子β3水平
        1.5.4 Western blot檢測共培養(yǎng)細胞COL2a1和Cx43的表達
    1.6 統(tǒng)計學分析
2 結果Results
    2.1 共培養(yǎng)細胞的形態(tài)變化
    2.2 ACs和BMSCs接觸共培養(yǎng)對細胞增殖分化的影響
    2.3 外源性轉化生長因子β3對共培養(yǎng)細胞增殖分化的影響
3 討論Discussion



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