目的原核表達、純化樹鼩干細胞生長因子(stem cell factor,SCF),并檢測其免疫原性。方法根據(jù)GenBank預(yù)測的樹鼩SCF基因序列設(shè)計引物,PCR擴增SCF基因,克隆至原核表達載體p ET-30a(+)中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-30a(+)-SCF,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達。表達的融合蛋白經(jīng)Ni柱純化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法檢測其免疫原性,并檢測SCF在樹鼩不同組織中的分布情況。結(jié)果重組表達質(zhì)粒pET-30a(+)-SCF經(jīng)酶切及測序證實構(gòu)建正確;表達的重組蛋白相對分子質(zhì)量約為34 500,表達量約占菌體總蛋白的35. 6%,以包涵體形式存在;純化后的重組蛋白純度達90%以上,可與兔抗人SCF多克隆抗體特異性結(jié)合,且免疫原性良好,抗血清效價為1∶256 000。在鼻、氣管、肺、脾、腎、食管中能檢測到SCF的分布。結(jié)論在大腸埃希菌中高效表達了重組SCF蛋白,純化復(fù)性后具有良好的免疫原性。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株及載體
    1.2 實驗動物
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 SCF基因的擴增及重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 目的基因的誘導(dǎo)表達
    1.6 表達產(chǎn)物的Western blot鑒定
    1.7 目的蛋白的純化
    1.8 SCF蛋白的免疫原性檢測
    1.9 SCF在樹鼩不同組織中分布的檢測
2 結(jié)果
    2.1 SCF基因擴增產(chǎn)物及重組表達質(zhì)粒的鑒定
    2.2 表達產(chǎn)物的鑒定
        2.2.1 SDS-PAGE分析
        2.2.2 Western blot分析
    2.3 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.4 目的蛋白的免疫原性
    2.5 SCF在樹鼩不同組織中的分布
3 討論



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