對(duì)腦膜炎敗血伊麗莎白金菌進(jìn)行糖苷酶功能基因組分析發(fā)現(xiàn),該菌存在一個(gè)GH27家族α-半乳糖苷酶基因�？寺≡摶虿⒈磉_(dá)蛋白后,利用人工合成的pNP底物研究其酶學(xué)性質(zhì),發(fā)現(xiàn)該酶具有α連接的半乳糖(α-galactose,α-Gal)底物特異性,酶反應(yīng)pH為3.0～8.0,反應(yīng)溫度為4～45℃。用不同寡糖底物進(jìn)一步確定,該酶能夠酶切直鏈末端α-1,3、1,4、1,6Gal。在豬紅細(xì)胞上進(jìn)行的酶切實(shí)驗(yàn)顯示,該酶能夠高效清除存在于豬紅細(xì)胞表面的末端Galα1-3Gal表位。末端α-半乳糖基化修飾在免疫與感染中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用,作用于種屬差異性表位的細(xì)菌α-半乳糖苷酶的發(fā)現(xiàn)將為該領(lǐng)域的研究提供一個(gè)新的工具,為緩解異種輸血中的超急性免疫排斥反應(yīng)提供一種可能。

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圖２ＥｍＧａｌａｓｅ純化及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析Ｌａｎｅ１：ＰａｇｅＲｕｌｅｒＰｒｅｓｔａｉｎｅｄＰｒｏｔｅｉｎＬａｄｄｅｒ．Ｌａｎｅｓ２，３

２ｍｇ／ｍＬ（ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ蛋白定量分析試劑盒測(cè)定）。圖１ＥｍＧａｌａｓｅ與代表性α－半乳糖苷酶的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析Ｆｉｇ．１ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆＥｍＧａｌａｓｅｉｎｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅａｌｐｈａｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＬａｎｅ１：ＰａｇｅＲｕｌｅｒＰｒ....

圖３ＥｍＧａｌａｓｅ與ｐＮＰ底物的反應(yīng)Ｆｉｇ．３ＴｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＥｍＧａｌａｓｅａｎｄｐＮＰｓｕｂｓｔｒａｔｅ

ＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＥｍＧａｌａｓｅ２．２ＥｍＧａｌａｓｅ的酶學(xué)性質(zhì)為驗(yàn)證ＥｍＧａｌａｓｅ是否具有α－半乳糖苷酶活性，我們用純化的ＥｍＧａｌａｓｅ處理人工合成的ｐＮＰ單糖底物。結(jié)果顯示ＥｍＧａｌａｓｅ可水解ｐＮＰ－α－Ｇａｌ，但對(duì)其他底物無(wú)反應(yīng)性，提示ＥｍＧａ....

圖６ＥｍＧａ?Ａ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（ｉｓｏｇｌｏｂｏｔｒｉｏｓｅ）

Ａ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（ｉｓｏｇｌｏｂｏｔｒｉｏｓｅ）．Ｂ：ＢｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＥｍＧａｌａｓｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＧａｌα１－４Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ（Ｐｋａｎｔｉｇｅｎ）．Ｃ：Ｂｅｆｏｒ....

本文編號(hào)：3897187