熱休克蛋白gp96是熱休克蛋白 90家族成員 ,能夠引起非特異性和特異性免疫反應(yīng)。得到大量高純度的蛋白質(zhì)是研究開發(fā)gp96的關(guān)鍵。然而重組的gp96容易在E .coli中降解 ,并在一定條件下形成多聚體。實(shí)驗(yàn)先將人gp96基因克隆到pET 30a載體上并在E .coliBlstar中表達(dá) ,再經(jīng)過(guò)親和層析、陰離子交換、分子篩分別純化gp96。最終去掉了大部分的降解片段和多聚體 ,得到一定量的可溶性gp96 ,為進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)和功能打下一定的基礎(chǔ)

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 重組子的克隆
        1.3.1 引物設(shè)計(jì):
        1.3.2 全長(zhǎng)gp96基因的克隆:
    1.4 全長(zhǎng)gp96的表達(dá)
    1.5 gp96的純化
        1.5.1 菌體裂解:
        1.5.2 gp96的離子交換親和層析:
        1.5.3 gp96的分子篩層析:
    1.6 Western blot檢測(cè) gp96
2 結(jié)果和分析
    2.1 gp96基因的表達(dá)
    2.2 20QE陰離子交換柱純化gp96蛋白
    2.3 分子篩純化人的gp96
    2.4 純化后gp96的Western雜交和SDS-PAGE
3 討論



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