目的篩選和驗(yàn)證與人體衰老進(jìn)程相關(guān)的甲基化基因,建立方便、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法,篩選能夠逆向調(diào)控與衰老過(guò)程相關(guān)的甲基化基因的物質(zhì)。方法通過(guò)GEO(Gene Expression Omnibus)公共數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并驗(yàn)證與人體衰老進(jìn)程相關(guān)的甲基化基因,建立甲基化qPCR檢測(cè)體系,驗(yàn)證目標(biāo)基因與人體衰老的相關(guān)性。使用一組具有抗衰老功效的天然提取物/物質(zhì)處理體外培養(yǎng)的細(xì)胞系,檢測(cè)細(xì)胞系表型變化及目標(biāo)基因甲基化水平變化。結(jié)果建立了促泌素(secretagogin,SCGN)和整合素亞基α2b(integrin subunit alpha 2b,ITGA2B)基因的甲基化檢測(cè)體系,在53例獨(dú)立樣本中驗(yàn)證了SCGN和ITGA2B基因的甲基化調(diào)控與人體衰老進(jìn)程相關(guān)。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)和沒(méi)食子酸(gallic acid,GA)抑制體外培養(yǎng)的細(xì)胞系的存活能力,且能逆轉(zhuǎn)SCGN和ITGA2B基因在衰老進(jìn)程中發(fā)生的甲基化調(diào)控。結(jié)論 SCGN和ITGA2B基因甲基化水平的變化有可能用于評(píng)估人體衰老狀態(tài)和監(jiān)測(cè)人體衰老進(jìn)程,同時(shí)也為開(kāi)發(fā)基于DNA甲基化...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 外周血樣本
        1.1.2 細(xì)胞
        1.1.3 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 篩選和驗(yàn)證與衰老進(jìn)程相關(guān)的甲基化基因
        1.3.2 建立和驗(yàn)證與衰老進(jìn)程相關(guān)的甲基化基因的qPCR檢測(cè)方法
        1.3.3 DNA甲基化位點(diǎn)的選定及其對(duì)應(yīng)引物、探針的合成
        1.3.4 DNA甲基化陰陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)及實(shí)時(shí)定量PCR及其結(jié)果判定
        1.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.6 細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 甲基化基因特異位點(diǎn)的篩選及驗(yàn)證
    2.2 甲基化陰陽(yáng)性對(duì)照體系的選擇
    2.3 SCGN的甲基化和ITGA2B的去甲基化水平均與年齡呈線(xiàn)性關(guān)系
    2.4 EGCG和GA抑制腫瘤細(xì)胞存活
    2.5 EGCG和GA逆轉(zhuǎn)細(xì)胞中的SCGN的甲基化和ITGA2B的去甲基化水平
3 討論



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