【目的】探討p53通路在結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AECⅡ)中的免疫調(diào)控作用。【方法】將供試的p53基因過(guò)表達(dá)和干擾載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,對(duì)其作用效果進(jìn)行驗(yàn)證。利用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染p53基因過(guò)表達(dá)和干擾載體到AECⅡ細(xì)胞系A(chǔ)549中,建立p53基因過(guò)表達(dá)和干擾A549系模型細(xì)胞。用牛結(jié)核分枝桿菌減毒株(BCG)分別感染未經(jīng)任何處理的A549細(xì)胞(感染對(duì)照組)及模型細(xì)胞,以未感染BCG的各類(lèi)A549細(xì)胞為參照。以β-actin為內(nèi)參基因,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot來(lái)分析信號(hào)分子p53、p300、NF-κB、TLR-4、TRAF6在mRNA和蛋白水平的表達(dá),以及炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8的mRNA表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】過(guò)表達(dá)載體plRES2-EGFP-p53 WT和干擾載體TP53-RNAi(2648)作用效果明顯,成功建立了p53基因過(guò)表達(dá)和干擾的A549細(xì)胞模型。BCG感染的對(duì)照組、p53基因過(guò)表達(dá)組和干擾組的A549細(xì)胞中,p53、p300、NF-κB、TLR-4、TRAF6在mRNA和蛋白水平的表達(dá)顯著或極顯著高于相應(yīng)的...

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與細(xì)胞株
    1.2 主要試劑
    1.3 p53基因過(guò)表達(dá)和干擾載體的驗(yàn)證
    1.4 p53基因過(guò)表達(dá)和干擾A549細(xì)胞模型的建立
    1.5 BCG感染對(duì)模型A549細(xì)胞p53信號(hào)通路相關(guān)因子表達(dá)的影響
        1.5.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.5.2 Western blot分析
    1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 p53基因過(guò)表達(dá)和干擾載體作用效果的驗(yàn)證
    2.2 p53基因過(guò)表達(dá)和干擾A549細(xì)胞模型的建立
    2.3 BCG感染模型A549細(xì)胞p53信號(hào)通路相關(guān)因子mRNA和蛋白水平的表達(dá)分析
        2.3.1 mRNA水平表達(dá)分析
        2.3.2 蛋白水平表達(dá)分析
    2.4 BCG感染模型A549細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)分析
3 討 論



本文編號(hào)：3843580