人干擾素ε是新近克隆的又一新型干擾素家族成員，對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能目前知之甚少。本研究從人胚胎的肺臟、肝臟、心臟和手四種器官中提取總RNA，利用RT-PCR技術(shù)對(duì)IFN-ε mRNA在不同組織中的表達(dá)分布進(jìn)行了分析；同時(shí)應(yīng)用酶切連接將獲得的IFN-ε目的基因片段插入表達(dá)載體pBV220中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α進(jìn)行表達(dá)，發(fā)酵擴(kuò)增培養(yǎng)后純化，得到純度高達(dá)90％以上的純品，并進(jìn)行了IFN-ε抗病毒活性的鑒定。 1、IFN-ε mRNA在人胚胎組織中的分布 利用RNA提取試劑TRIZOL LS Reagent從人胚胎的肺臟、肝臟、心臟和手四種組織中提取總RNA，以看家基因β-actin作為系統(tǒng)內(nèi)參照，通過(guò)RT-PCR技術(shù)分析IFN-ε mRNA在不同組織的分布情況，結(jié)果表明IFN-ε mRNA在胚胎的肺臟和肝臟中有較高水平的表達(dá)，而在心臟和手中幾乎沒(méi)有表達(dá)或表達(dá)量很低。 2、IFN-ε的表達(dá)與純化 RT-PCR擴(kuò)增得到的IFN-ε基因經(jīng)EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ雙酶切后，插入同樣處理的溫控型載體質(zhì)粒pBV220中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，42℃誘導(dǎo)表達(dá)后用12％聚丙烯酰胺...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
前言
材料與方法
    1 材料
        1.1 載體與菌株
        1.2 細(xì)胞與病毒
        1.3 酶和試劑
    2 方法
        2.1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的組織分布
        2.2 目的基因重組表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
        2.3 序列測(cè)定與分析
        2.4 基因工程重組表達(dá)菌的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        2.6 表達(dá)產(chǎn)物純化
        2.7 IFN-ε抗病毒活性的測(cè)定
結(jié)果與分析
    1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的組織分布
    2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    3 IFN-ε的測(cè)序結(jié)果
    4 基因工程重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)和SDS-PAGE分析
    5 表達(dá)產(chǎn)物的純化與鑒定
    6 IFN-ε抗病毒活性的測(cè)定
討論
    1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的組織分布
    2 發(fā)酵表達(dá)
    3 產(chǎn)物純化
    4 生物學(xué)性質(zhì)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述



本文編號(hào)：3773637