目的 提供高質(zhì)量的重組膜抗原是提高HIV ELISA檢測(cè)試劑質(zhì)量、提高gp41抗體檢測(cè)特異性和靈敏性的的最重要的環(huán)節(jié)。本課題構(gòu)建了HIV-1 SF2株跨膜蛋白gp41第二優(yōu)勢(shì)表位簇基因的原核高效表達(dá)克隆，初步檢驗(yàn)該融合蛋白抗原性，探討將其作為侯選多肽用于制備診斷試劑、檢測(cè)HIV-1抗體的可能性；并探討提高原核表達(dá)的途徑。 方法利用密碼子的兼并性，在保證目的基因編碼氨基酸不變和不改變引物特異性的前提下，在PCR上游引物引入突變堿基。然后，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增HIV-1SF2毒株跨膜蛋白gp41基因片段(nt 9153-9233)。該基因編碼相當(dāng)于即160的第649-675位氨基酸殘基，即gp41的第二優(yōu)勢(shì)表位簇。PCR產(chǎn)物和融合蛋白表達(dá)載體pGEX-4T-2經(jīng)EcoRI和SalI雙酶切后連接，得到重組質(zhì)粒pGEX-4T-2／SE，并轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌DH5α。獲得含重組質(zhì)粒的宿主菌，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，高效表達(dá)出HIV-1第二優(yōu)勢(shì)表位簇融合蛋白，產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE，使用凝膠成像系統(tǒng)掃描目的融合蛋白的含量百分比，并進(jìn)行Western-Blot檢測(cè)其與HIV-1陽(yáng)性血清及正常人血清的...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 方法
3 結(jié)果
    3.1 目的基因的擴(kuò)增
    3.2 原核重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
    3.3 表達(dá)蛋白的檢測(cè)
    3.4 重組蛋白的抗原性分析
4 討論
5 小結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3748053