Fcα/μR是一種新發(fā)現(xiàn)的IgA和IgM的Fc受體。人Fcα/μR為單基因家族成員,其基因位于1號染色體1q32區(qū),毗鄰其它FcR基因,包括FcγR1a、FcγR2、FcγR3、FcγR1a和pIgR。小鼠的Fcα/μR高親和力的結(jié)合IgM,中等親和力的結(jié)合IgA。人Fcα/μR為Ⅰ型跨膜蛋白,包含有522個(gè)氨基酸和3個(gè)膜外區(qū)結(jié)構(gòu)域。其中Ig樣結(jié)構(gòu)域EC2與人、牛和小鼠的pIgR膜外區(qū)的第一個(gè)結(jié)構(gòu)域有很高的序列同源性,提示這兩個(gè)受體間可能存在親緣上和功能上的關(guān)系。小鼠的Fcα/μR表達(dá)在胸腺、脾、肝、腎、小腸和大腸、睪丸和一些成熟的B細(xì)胞和單核細(xì)胞上。人的Fcα/μR表達(dá)在腎、小腸和二級淋巴器官。為了確定Fcα/μR在免疫系統(tǒng)中的作用,區(qū)分Fcα/μR與pIgR的表達(dá)和功能,我們制備了抗Fcα/μR與pIgR的單克隆抗體。Fcα/μR與pIgR的膜外區(qū)分別構(gòu)建到pET30a質(zhì)粒中,在E.coli中表達(dá)。得到的包涵體蛋白經(jīng)純化后免疫Balb/c小鼠并進(jìn)行細(xì)胞融合。產(chǎn)生的單克隆抗體經(jīng)ELISA、流失細(xì)胞分析、Western blott和免疫組化分析鑒定。用確定的特異性抗體進(jìn)行組織人多組織器... 

【文章頁數(shù)】：176 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
Standard Abbreviations
前言
    一、IgA生物學(xué)
        1、IgA的生物合成與代謝
        2、IgA的結(jié)構(gòu)
        3、IgA的生物學(xué)功能
    二、IgA的Fc受體
        1、Fcα/μR的分布和表達(dá)調(diào)控
        2、Fcα/μR的基因結(jié)構(gòu)
        3、Fcα/μR的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
        4、Fcα/μR與IgA、IgM的結(jié)合
        5、Fcα/μR的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        6、Fcα/μR介導(dǎo)的生理學(xué)功能
    三、本論文的研究目標(biāo)
第一部分:抗人Fcα/μR和pIgR單克隆抗體的制備、純化與鑒定
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        1.細(xì)胞系
        2.菌株、質(zhì)粒載體和cDNA克隆
        3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.主要化學(xué)試劑
        5.主要抗體
        6.工具酶、分子量標(biāo)準(zhǔn)及試劑盒
        7.儀器設(shè)備
        8.溶液配制
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1.分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作
        2.目的蛋白的原核表達(dá)和純化
        3.單克隆抗體的制備、篩選和保藏
        4.原核蛋白的復(fù)性重折疊
        5.Fcα/μR的真核細(xì)胞表達(dá)
        6.蛋白質(zhì)的標(biāo)記和交聯(lián)
        7.IgA、IgM、sIgA的分離和純化
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.人Fcα/μR膜外區(qū)的原核表達(dá)
        2.抗-Fcα/μR的單克隆抗體的制備和篩選
        3.人Fcα/μR的真核細(xì)胞表達(dá)
        4.人pIgR膜外區(qū)的原核表達(dá)、復(fù)性和抗pIgR的抗體篩選
        5.人血清IgA的分離純化
    四、討論
第二部分:Fcα/μR和pIgR在多種組織器官的表達(dá)比較
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        1.主要抗體
        2.儀器設(shè)備
        3.主要溶液配制
        4.多種正常器官組織芯片
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.石蠟切片的免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.消化道:胃——小腸——闌尾——結(jié)腸——直腸
        2.淋巴組織:脾和扁桃體
        3.肝膽組織
        4.肺組織
        5.腎組織
        6.乳腺組織
        7.睪丸組織、前列腺組織
        8.腦組織
        9.心劇組織
        10.消化道Fcα/μR陽性細(xì)胞的其它抗體染色
    四、討論
        1.基于核酸序列的Fcα/μR和pIgR電子表達(dá)譜分析
        2.基于蛋白序列和單抗的Fcα/μR和pIgR組織表達(dá)譜分析
        3.基于組織表達(dá)譜的Fcα/μR功能初探
第三部分:Fcα/μR在腎細(xì)胞上的表達(dá)和在IgA腎病中的作用
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        1.IgA腎病及對照組病人資料
        2.IgA腎病病理組織切片
        3.細(xì)胞株
        4.抗體
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1.HK-2細(xì)胞上不同IgA受體的RT-PCR
        2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC細(xì)胞上Fcα/μR的表達(dá)分析
        3.腎組織的免疫組織化學(xué)分析和免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)
        4.HK-2和PTEC細(xì)胞結(jié)合IgA
        5.HK-2細(xì)胞吞噬IgA2、IgM和IgG3免疫復(fù)合物
        6.IgA病人血清或血清IgA細(xì)胞孵育實(shí)驗(yàn)
        7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.HK-2細(xì)胞上不同IgA受體的RT-PCR
        2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC細(xì)胞上Fcα/μR的表達(dá)分析
        4.表達(dá)在HK-2細(xì)胞上的Fcα/μR為功能性IgA受體
        5.Fcα/μR和IgA在IgAN組織上的共定位分析
        6.IgAN病人的血清IgA可以上調(diào)HK-2細(xì)胞上的Fcα/μR表達(dá)
    四、討論
綜述:中性粒細(xì)胞上的Fc受體
    1.中性粒細(xì)胞膜上各種FcR的基本結(jié)構(gòu)、分布和基因異質(zhì)性
        1.1 FcγRⅠ(CD64)
        1.2 FcγRⅡ(CD32)
        1.3 FcγRⅢ(CD16)
        1.4 FcγR subunits
        1.5 FcαR(CD89)
    2.FcR的晶體結(jié)構(gòu)和功能部位
        2.1 FcγR與IgG的結(jié)合
        2.2 FcαRⅠ與IgA的結(jié)合
    3.FcR介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        3.1 FcR在細(xì)胞表面的聚集
        3.2 FcR遷入細(xì)胞膜上的特殊區(qū)域——脂閥(lipid raft)
        3.3 活化后細(xì)胞膜酪氨酸的磷酸化
    4.FcR介導(dǎo)的細(xì)胞生物功能
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的文章情況
附錄2 質(zhì)粒載體圖譜和多克隆位點(diǎn)
致謝



本文編號：3668713