Fcα/μR是一種新發(fā)現(xiàn)的IgA和IgM的Fc受體。人Fcα/μR為單基因家族成員,其基因位于1號染色體1q32區(qū),毗鄰其它FcR基因,包括FcγR1a、FcγR2、FcγR3、FcγR1a和pIgR。小鼠的Fcα/μR高親和力的結合IgM,中等親和力的結合IgA。人Fcα/μR為Ⅰ型跨膜蛋白,包含有522個氨基酸和3個膜外區(qū)結構域。其中Ig樣結構域EC2與人、牛和小鼠的pIgR膜外區(qū)的第一個結構域有很高的序列同源性,提示這兩個受體間可能存在親緣上和功能上的關系。小鼠的Fcα/μR表達在胸腺、脾、肝、腎、小腸和大腸、睪丸和一些成熟的B細胞和單核細胞上。人的Fcα/μR表達在腎、小腸和二級淋巴器官。為了確定Fcα/μR在免疫系統(tǒng)中的作用,區(qū)分Fcα/μR與pIgR的表達和功能,我們制備了抗Fcα/μR與pIgR的單克隆抗體。Fcα/μR與pIgR的膜外區(qū)分別構建到pET30a質粒中,在E.coli中表達。得到的包涵體蛋白經純化后免疫Balb/c小鼠并進行細胞融合。產生的單克隆抗體經ELISA、流失細胞分析、Western blott和免疫組化分析鑒定。用確定的特異性抗體進行組織人多組織器... 

【文章頁數(shù)】：176 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
Standard Abbreviations
前言
    一、IgA生物學
        1、IgA的生物合成與代謝
        2、IgA的結構
        3、IgA的生物學功能
    二、IgA的Fc受體
        1、Fcα/μR的分布和表達調控
        2、Fcα/μR的基因結構
        3、Fcα/μR的蛋白質結構
        4、Fcα/μR與IgA、IgM的結合
        5、Fcα/μR的信號轉導
        6、Fcα/μR介導的生理學功能
    三、本論文的研究目標
第一部分:抗人Fcα/μR和pIgR單克隆抗體的制備、純化與鑒定
    一、實驗材料
        1.細胞系
        2.菌株、質粒載體和cDNA克隆
        3.實驗動物
        4.主要化學試劑
        5.主要抗體
        6.工具酶、分子量標準及試劑盒
        7.儀器設備
        8.溶液配制
    二、實驗方法
        1.分子生物學常規(guī)實驗操作
        2.目的蛋白的原核表達和純化
        3.單克隆抗體的制備、篩選和保藏
        4.原核蛋白的復性重折疊
        5.Fcα/μR的真核細胞表達
        6.蛋白質的標記和交聯(lián)
        7.IgA、IgM、sIgA的分離和純化
    三、實驗結果
        1.人Fcα/μR膜外區(qū)的原核表達
        2.抗-Fcα/μR的單克隆抗體的制備和篩選
        3.人Fcα/μR的真核細胞表達
        4.人pIgR膜外區(qū)的原核表達、復性和抗pIgR的抗體篩選
        5.人血清IgA的分離純化
    四、討論
第二部分:Fcα/μR和pIgR在多種組織器官的表達比較
    一、實驗材料
        1.主要抗體
        2.儀器設備
        3.主要溶液配制
        4.多種正常器官組織芯片
    二、實驗方法
        1.免疫組織化學實驗
        2.石蠟切片的免疫熒光實驗
    三、實驗結果
        1.消化道:胃——小腸——闌尾——結腸——直腸
        2.淋巴組織:脾和扁桃體
        3.肝膽組織
        4.肺組織
        5.腎組織
        6.乳腺組織
        7.睪丸組織、前列腺組織
        8.腦組織
        9.心劇組織
        10.消化道Fcα/μR陽性細胞的其它抗體染色
    四、討論
        1.基于核酸序列的Fcα/μR和pIgR電子表達譜分析
        2.基于蛋白序列和單抗的Fcα/μR和pIgR組織表達譜分析
        3.基于組織表達譜的Fcα/μR功能初探
第三部分:Fcα/μR在腎細胞上的表達和在IgA腎病中的作用
    一、實驗材料
        1.IgA腎病及對照組病人資料
        2.IgA腎病病理組織切片
        3.細胞株
        4.抗體
    二、實驗方法
        1.HK-2細胞上不同IgA受體的RT-PCR
        2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC細胞上Fcα/μR的表達分析
        3.腎組織的免疫組織化學分析和免疫熒光雙標實驗
        4.HK-2和PTEC細胞結合IgA
        5.HK-2細胞吞噬IgA2、IgM和IgG3免疫復合物
        6.IgA病人血清或血清IgA細胞孵育實驗
        7.統(tǒng)計學分析
    三、實驗結果
        1.HK-2細胞上不同IgA受體的RT-PCR
        2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC細胞上Fcα/μR的表達分析
        4.表達在HK-2細胞上的Fcα/μR為功能性IgA受體
        5.Fcα/μR和IgA在IgAN組織上的共定位分析
        6.IgAN病人的血清IgA可以上調HK-2細胞上的Fcα/μR表達
    四、討論
綜述:中性粒細胞上的Fc受體
    1.中性粒細胞膜上各種FcR的基本結構、分布和基因異質性
        1.1 FcγRⅠ(CD64)
        1.2 FcγRⅡ(CD32)
        1.3 FcγRⅢ(CD16)
        1.4 FcγR subunits
        1.5 FcαR(CD89)
    2.FcR的晶體結構和功能部位
        2.1 FcγR與IgG的結合
        2.2 FcαRⅠ與IgA的結合
    3.FcR介導的細胞信號轉導
        3.1 FcR在細胞表面的聚集
        3.2 FcR遷入細胞膜上的特殊區(qū)域——脂閥(lipid raft)
        3.3 活化后細胞膜酪氨酸的磷酸化
    4.FcR介導的細胞生物功能
參考文獻
附錄1 攻讀博士學位期間發(fā)表的文章情況
附錄2 質粒載體圖譜和多克隆位點
致謝



本文編號：3668713