背景:神經(jīng)干/祖細胞廣泛應(yīng)用于神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)相關(guān)性疾病和細胞移植等研究,體外分離培養(yǎng)的神經(jīng)干/祖細胞能夠為相關(guān)研究提供細胞模型。目的:探討分離新生小鼠海馬組織并高效培養(yǎng)出神經(jīng)干/祖細胞的方法,并使用貼壁培養(yǎng)法對其增殖以及分化能力進行鑒定。方法:分離新生C57BL/6小鼠海馬組織,培養(yǎng)原代神經(jīng)干/祖細胞并擴增,進行形態(tài)學觀察;聯(lián)合使用多聚賴氨酸和層粘連蛋白促進細胞貼附,進行貼壁培養(yǎng);免疫熒光法檢測特異性標志蛋白Nestin表達和增殖指標Ki-67的表達;使用神經(jīng)干/祖細胞分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7 d后,免疫熒光法檢測GFAP、DCX、Tuj1和S100β的表達。結(jié)果與結(jié)論:（1）培養(yǎng)的神經(jīng)干/祖細胞約82%表達Nestin,約49%表達Ki-67;（2）誘導(dǎo)分化后,少數(shù)細胞為DCX陽性,大多數(shù)細胞為GFAP陽性。熒光雙色染色后顯示Tuj1和S100β表達的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞比例為1∶1.7;（3）結(jié)果顯示,從新生C57BL/6小鼠海馬組織中成功分離并高效培養(yǎng)出神經(jīng)干/祖細胞,貼壁培養(yǎng)后有效地對其增殖和分化能力進行了鑒定,能夠為進一步實驗研究提供足夠的細胞來源。 

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神經(jīng)干/祖細胞原代和傳代培養(yǎng)Figure1Primaryandsubcultureofneuralstem/progenitorcells于100μm；G為傳代培養(yǎng)第5天Accutase酶消化后第0天(×200)

圖4分化培養(yǎng)7d后神經(jīng)干/祖細胞分化能力鑒定Figure4Identificationofdifferentiationabilityofneuralstem/progenitorcellsafter7daysofdifferentiation紅色為Tuj1染色陽性

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Brain injury and neural stem cells[J]. Parker E.Ludwig,Finosh G.Thankam,Arun A.Patil,Andrea J.Chamczuk,Devendra K.Agrawal.  Neural Regeneration Research. 2018(01)
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