CRISPR/Cas系統(tǒng)從發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用以來,熱度持續(xù)上升。在過去幾年中,這種技術(shù)已經(jīng)成為了基因編輯的標(biāo)準(zhǔn)方案。該技術(shù)用一條指導(dǎo)RNA（guideRNA）來引導(dǎo)Cas9或Cpf1等核酸酶在特定的位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)雙鏈打斷。但是這種系統(tǒng)也有可能在非特異性的位置進(jìn)行切割,這種現(xiàn)象成為"脫靶效應(yīng)"。脫靶剪切現(xiàn)象可能會(huì)給基因功能研究或者臨床治療帶來很多麻煩。為了深入研究Cpf1的特異性,本研究通過一套雙熒光報(bào)告系統(tǒng)探索了單核苷酸錯(cuò)配的影響。結(jié)果表明,間隔區(qū)內(nèi)的poly（T）結(jié)構(gòu)會(huì)阻止Cpf1的靶向切割。而且rA的錯(cuò)配似乎是CRISPR/Cpf1容忍度最低的一類,這與CRISPR/Cas9的情況相同。這種相似性可能來源于兩種酶在進(jìn)化上的同源性。上述結(jié)果表明,在使用CRISPR/Cp1或者CRISPR/Cas9的時(shí)候應(yīng)當(dāng)更多注意其脫靶效應(yīng),因?yàn)檫@種效應(yīng)是這套系統(tǒng)的一個(gè)內(nèi)在特性。 

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【文章目錄】：
1. Introduction
2. Materials and methods
    2.1. Plasmids and primers
    2.2. Cleavage efficiency assay
3. Results
    3.1. The cleavage efficiency can be sensitively detected by the dual-luciferase assay
    3.2. Poly (T) existing in spacer may abolish the cleavage activity
    3.3. Targeting specificity of PAM sequence
    3.4. rA Mismatches tend to be the lowest tolerance in AAVS1
4. Discussion



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