目的:建立BD FACSAria II流式細胞分選儀富集PX458空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染J774A.1細胞的方法并進行技術(shù)優(yōu)化,確立用于篩選J774A.1細胞的最佳條件。方法:構(gòu)建PX458空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染J774A.1細胞株,進行7-AAD染色。選擇BD FACSAria II流式細胞分選儀的100 μm噴嘴以及initial、4-way purity、purity、yield、fine tune、single cell 6種分選模式分選J774A.1細胞的GFP陽性轉(zhuǎn)染株,比較儀器各部分參數(shù)變化對分選效率的影響。結(jié)果:在儀器穩(wěn)定的液流條件下,100 μm噴嘴各分選模式所得細胞純度均達80%以上,其中purity模式分選效率最高,達95.7%±1.0%。結(jié)論:使用BD FACSAria II流式細胞分選儀100 μm噴嘴分選PX458空載轉(zhuǎn)染的J774A.1細胞選擇purity分選模式最合適。 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染:
        1.2.2 Western blot鑒定:
        1.2.3 細胞上機前處理及染色:
        1.2.4 流式細胞儀調(diào)試:
        1.2.5 流式細胞分選與分選效率檢測:
        1.2.6細胞培養(yǎng)與凍存:
    1.3 統(tǒng)計學處理方法
2 結(jié)果
    2.1 細胞培養(yǎng)
    2.2 GFP蛋白表達鑒定
    2.3 主液流調(diào)試
    2.4 分選模式與分選純度
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用流式細胞技術(shù)分選單核細胞亞群不同預富集方法的探討[J]. 楊紅艷,焉力方,王如剛,周欣.  現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志. 2018(01)
[2]第三代流式細胞分選儀及96孔板分選單個細胞的方法及參數(shù)優(yōu)化[J]. 閔智慧,程韻楓.  中國臨床醫(yī)學. 2016(06)
[3]高端流式分選與免疫磁珠法純化T細胞的比較[J]. 黃瑩瑩,尹盛夏,曹文強,李艷偉,王佳佳.  國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報. 2016 (22)
[4]流式細胞儀細胞分選參數(shù)調(diào)校方法的研究[J]. 周密,張全勝,包明柱.  醫(yī)療裝備. 2016(07)
[5]FACSAria流式細胞儀無菌操作分選高純度細胞亞群[J]. 劉錫娟,丁慧榮,田志華,韓海勃,張宏.  安徽醫(yī)科大學學報. 2014(12)
[6]流式分選儀FACSAriaⅡ分選GFP陽性乳腺癌MCF-7細胞株的條件優(yōu)化研究[J]. 郭陳智,史桂英.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2013(01)
[7]FACS Aria流式細胞分選儀質(zhì)量控制體系的優(yōu)化[J]. 張暉,周春保.  中國醫(yī)療器械雜志. 2009(03)
[8]FACS-Aria流式細胞分選調(diào)試參數(shù)和最佳條件的設定[J]. 曹云新,胡金濤,楊安鋼.  第四軍醫(yī)大學學報. 2007(19)



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