本文關(guān)鍵詞：益腎健脾方干預少弱精子癥小鼠模型的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：男性不育癥是影響人類繁衍和健康的重大疾病,其中少弱精子癥是十分常見的原因。其具體的發(fā)病機制尚未完全闡明,現(xiàn)代醫(yī)學在少弱精子癥診斷方面已日漸成熟,但治療層面仍缺乏比較有效手段。目前臨床上尚缺乏理想的治療藥物,且用藥多為經(jīng)驗性。外科治療能夠在一定程度上矯正器質(zhì)性病變及梗阻因素引起的男性不育癥。近些年輔助生殖技術(shù)發(fā)展迅速,但由于存在費用昂貴、成功率不高、遺傳和倫理等諸多方面的問題。中醫(yī)藥辨證論治具有諸多優(yōu)勢。當前治療仍多從腎立論、兼以祛邪,而忽視健脾益氣的重要性。我們前期研究發(fā)現(xiàn)益腎健脾法治療能夠顯著改善精液質(zhì)量。根據(jù)長期臨床實踐并結(jié)合中醫(yī)學理論“腎為先天之本,脾為后天之源”,提出“脾腎虧虛,精失所養(yǎng)”為少弱精子癥發(fā)生的基本病因病機,治宜“益腎健脾填精”為主。目前對于少弱精子發(fā)病機制的研究當中,自由基損傷學說及細胞凋亡學說是當前研究熱點。其中線粒體信號通路是一條重要的凋亡通路,但是目前對于此通路系統(tǒng)與少弱精子癥關(guān)系的研究仍不夠深入。現(xiàn)代醫(yī)學研究表明線粒體為所有物質(zhì)徹底氧化分解的最終場所,其核心功能是進行氧化磷酸化及三羧酸循環(huán)合成三磷酸腺苷(ATP),直接為細胞的生命活動供應能量。本研究的重點為驗證益腎健脾方治療少弱精子癥是否亦是通過“改善線粒體結(jié)構(gòu)和功能”這一可能的環(huán)節(jié)和作用機制。為中醫(yī)學理論“脾腎虧虛,精失所養(yǎng)”在防治少弱精子癥臨床應用方面奠定新的實驗基礎。目的：觀察益腎健脾方對少弱精子癥小鼠模型睪丸、附睪組織病理、精液質(zhì)量、血清性激素水平、線粒體超微結(jié)構(gòu)及線粒體膜電位(MMP)的影響。方法：取雄性巴比賽(BALB/c)小鼠共60只,將其隨機分為正常組、模型組、陽性對照組(東維力口服液)、中藥組(益腎健脾方低、高劑量組)各12只；除正常組以外各組小鼠均給予連續(xù)每天灌胃雷公藤多苷(GTW)4周(40mg/kg),制備少弱精子癥小鼠模型；造模結(jié)束后,陽性對照組、中藥組分別給予連續(xù)每天灌胃東維力口服液(10ml/kg)、益腎健脾方低、高劑量(分別為1.32.70mg/kg),正常組、模型組均給予連續(xù)每天灌胃等量蒸餾水(10ml/kg),共4周。治療結(jié)束后,小鼠附睪、睪丸組織病理切片、HE染色,觀察其組織病理學變化；應用偉力精子測試儀檢測小鼠精液質(zhì)量；應用流式細胞技術(shù)、熒光染色法檢測小鼠精子MMP中正常精子百分率(JC-1+%)；應用透射電子顯微鏡觀察小鼠精子線粒體超微結(jié)構(gòu)；應用酶聯(lián)免疫夾心法檢測小鼠血清性激素水平。結(jié)果：1睪丸、附睪病理：正常組小鼠睪丸曲細精管排列規(guī)則、緊密,其內(nèi)包含各級生精細胞和支持細胞(Sertoli細胞)。模型組小鼠睪丸曲細精管萎縮,各級生精細胞排列紊亂、疏松,數(shù)量明顯減少,較為嚴重者僅有Sertoli細胞。藥物干預后少數(shù)曲細精管內(nèi)生精細胞減少,病變程度及范圍較模型組顯著減輕。正常組附睪管腔外間質(zhì)組織充實有序,腔內(nèi)上皮細胞清晰,排列整齊呈高柱狀,可見大量精子。模型組附睪管間隙增加、間質(zhì)組織減少,腔內(nèi)上皮細胞排列紊亂或缺失、呈矮柱狀,未見或少見精子。藥物干預后各組附睪腔外組織較模型組充實有序,腔內(nèi)上皮細胞數(shù)量增加、排列尚整齊、結(jié)構(gòu)近乎完整,可見較多精子。2精液質(zhì)量：陽性對照組、中藥低、高劑量組A級、(A+B)級、精子總活力高于模型組(P0.05),差異顯著,具有統(tǒng)計學意義；中藥低劑量組高于陽性對照組及中藥高劑量組,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P0.05);中藥高劑量組與陽性對照組相比無顯著性差異(P值分別為0.4030、0.4676、0.4405,P0.05),無統(tǒng)計學意義。正常組、陽性對照組、中藥低、高劑量組的精子濃度、總數(shù)高于模型組,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；陽性對照組、中藥低、高劑量組相互之間無顯著性差異(P0.05),無統(tǒng)計學意義。3精子線粒體結(jié)構(gòu)及膜電位：模型組小鼠精子MMP水平低于正常組(P0.001),差異顯著具有統(tǒng)計學意義；中藥低劑、高劑量組高于陽性對照組,差異顯著具有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.0008、0.0001,P0.05)；中藥低劑量組高于陽性對照組,差異顯著具有統(tǒng)計學意義(P=0.02530.05)。正常組小鼠精子的尾部中段橫切面可見完整的線粒體鞘結(jié)構(gòu),呈環(huán)形包繞著致密纖維和軸絲,外周9根纖維,中間9根軸絲和內(nèi)部2個結(jié)構(gòu)清晰的微管,共同構(gòu)成了9+9+2結(jié)構(gòu)。模型組整個精子線粒體腫脹明顯、纖維明顯疏松、軸絲斷裂,9+9+2結(jié)構(gòu)遭受破壞。藥物干預后各組精子線粒體鞘結(jié)構(gòu)較完整,腫脹較前顯著減輕,纖維、軸絲結(jié)構(gòu)較整齊、完整,9+9+2結(jié)構(gòu)尚清晰。4血清性激素水平：模型組小鼠血清FSH、LH水平高于正常組(P值分別為0.0001、0.0433,P0.05),差異顯著具有統(tǒng)計學意義；藥物干預后小鼠血清FSH、LH水平與正常組相比無顯著差異(P0.05)；與模型組相比,陽性對照組,中藥低、高劑量組小鼠血清FSH、LH水平低于模型組(P0.05),差異顯著有統(tǒng)計學意義；模型組小鼠血清T低于正常組(P=0.00090.05),差異顯著有統(tǒng)計學意義；藥物干預后各組小鼠血清T水平與模型組相比無顯著差異(P0.05)。結(jié)論：益腎健脾方能夠調(diào)節(jié)少弱精子癥小鼠血清性激素水平；減輕GTW對小鼠睪丸和附睪的病理損害；改善精子線粒體的結(jié)構(gòu),提高精子MMP水平；改善精子發(fā)生及成熟,從而顯著改善少弱精子癥小鼠的精液質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】：雷公藤多苷 精液質(zhì)量 線粒體 血清性激素水平 少弱精子癥 益腎健脾方
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R277.5;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮略詞12-13
• 第一部分 文獻綜述13-41
• 1 中醫(yī)文獻研究13-28
• 1.1 少弱精子癥中醫(yī)學認識源流13-14
• 1.2 少弱精子癥中醫(yī)學病因病機14-16
• 1.3 少弱精子癥中醫(yī)藥治療16-23
• 1.4 中西醫(yī)結(jié)合治療少弱精子癥23-24
• 1.5 中醫(yī)藥治療少弱精子癥的實驗研究24-25
• 參考文獻25-28
• 2 西醫(yī)文獻研究28-41
• 2.1 西醫(yī)診斷標準及流行病學28-29
• 2.2 少弱精子癥的病因病機29-31
• 2.3 少弱精子癥的分子生物學機制31-33
• 2.4 西醫(yī)對少弱精子癥的治療33-35
• 2.5 輔助生殖技術(shù)35-36
• 參考文獻36-41
• 前言41-43
• 第二部分 實驗研究43-61
• 1 材料43-45
• 2 方法45-49
• 2.1 實驗造模45
• 2.2 實驗分組及干預45-46
• 2.3 實驗取材46
• 2.4 實驗檢測46-49
• 2.5 統(tǒng)計學方法49
• 3 結(jié)果49-56
• 4 小結(jié)56
• 5 討論56-61
• 結(jié)語61-62
• 1 結(jié)論61
• 2 創(chuàng)新點61
• 3 不足及展望61-62
• 參考文獻62-64
• 附錄64-70
• 致謝70-71
• 在學期間主要研究成果71-72
• 個人簡歷72

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