KP1₄563基因是肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中假設(shè)的蛋白編碼基因,與Ⅲ型菌毛的功能有關(guān)。本實驗首先采用同源重組基因敲除方法構(gòu)建肺炎克雷伯菌KP1₄563基因缺失的突變株（Kp-△4563）,然后PCR擴增KP1₄563基因片段,克隆到質(zhì)粒p BAD33上,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入Kp-△4563獲得回補株（Kpc-△4563）。分別測定野生株、突變株、回補株用普通LB培養(yǎng)基,改良Minka培養(yǎng)基以及含膽汁鹽的LB培養(yǎng)基培養(yǎng)時生物膜形成能力,以此來探討KP1₄563基因以及不同培養(yǎng)基對肺炎克雷伯菌體外生物膜形成的影響。我們成功構(gòu)建KP1₄563基因缺失的突變株和回補株Kpc-△4563。與野生株相比,突變株Kp-△4563生物膜形成能力減弱,回補株介于野生株和突變株之間。使用改良Minka培養(yǎng)基使菌株菌毛化以及加入膽汁鹽可以增加生物膜的形成能力。這些分析表明肺炎克雷伯菌KP1₄563基因能正調(diào)控細(xì)菌生物膜的形成。體外培養(yǎng)使細(xì)菌菌毛化以及加入膽汁鹽可以促進生物膜... 

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【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 突變株的構(gòu)建
    1.2 回補株的構(gòu)建
    1.3 生物膜表型分析
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基
    3.2 試驗方法
        3.2.1 構(gòu)建突變株Kp-△4563
        3.2.2 構(gòu)建回補株Kpc-△4563
        3.2.3 生物膜表型實驗
作者貢獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]ZFNs、TALENs和CRISPR-Cas基因組靶向編輯技術(shù)及其在植物中的應(yīng)用[J]. 廖鵬飛,聶旺,余雅心,童普國,李紹波,朱友林.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016(02)
[3]肺炎克雷伯菌基因無痕敲除方法的建立[J]. 高鈺雙,馮甜,邱景富,楊瑞馥,周冬生,李迎麗.  軍事醫(yī)學(xué). 2013(06)
[4]雞源肺炎克雷伯菌菌毛的分型[J]. 何禮洋,韓文瑜,賈艷,雷連成,楊洋.  中國生物制品學(xué)雜志. 2007(08)
[5]外源載體高效轉(zhuǎn)化肺炎克雷伯菌的新途徑[J]. 鄭艷,劉喜朋,劉建華.  微生物學(xué)報. 2007(04)



本文編號：3652718