目的原核表達柯薩奇病毒A組6型（Coxsackie virus group A 6 strain,CVA6）衣殼蛋白VP1,并制備其抗血清。方法合成經密碼子優(yōu)化的CVA6-VP1全長基因,克隆至原核表達載體pET-28a中,構建重組質粒pET-28a-VP1,轉化感受態(tài)E. coli BL21（DE3）,經IPTG誘導表達目的蛋白,同時優(yōu)化IPTG終濃度（0. 1、0. 2、0. 3、0. 5 mmol/L）、誘導溫度（15、20、25、30℃）及誘導時間（6、8、12、16 h）。表達產物采用Ni-NTA柱親和層析純化,將純化重組蛋白免疫新西蘭兔,制備VP1抗血清,微量細胞病變法檢測血清抗體效價。結果重組質粒p ET-28a-VP1經雙酶切及測序鑒定,構建正確。重組蛋白最適誘導條件為:IPTG終濃度為0. 3 mmol/L,誘導溫度為15℃,誘導時間為12 h。重組蛋白相對分子質量約34 000,于上清和包涵體中均有表達,純化后純度可達95%以上。兔血清效價均> 1∶8,呈陽性。結論成功于原核表達系統(tǒng)中高效表達了可溶性CVA6-VP1蛋白,且獲得效價較高的抗血清。 

【文章來源】：中國生物制品學雜志. 2019,32(02)CSCD

【文章頁數】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 載體、菌株、毒株及細胞
    1.2主要試劑及儀器
    1.3 實驗動物
    1.4 重組質粒的構建
    1.5 目的蛋白誘導表達條件的優(yōu)化
        1.5.1 IPTG濃度的優(yōu)化
        1.5.2 誘導溫度的優(yōu)化
        1.5.3 誘導時間的優(yōu)化
    1.6 最適條件的誘導表達
    1.7 目的蛋白的純化
    1.8 抗血清的制備
    1.9 中和抗體效價的檢測
2 結果
    2.1 重組質粒的鑒定
    2.2 目的蛋白誘導表達條件的優(yōu)化
        2.2.1 IPTG濃度的優(yōu)化
        2.2.2 誘導溫度的優(yōu)化
        2.2.3 誘導時間的優(yōu)化
    2.3 最適條件誘導表達產物的鑒定
    2.4 純化產物的鑒定
    2.5 中和抗體效價
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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