目的原核表達(dá)柯薩奇病毒A組6型（Coxsackie virus group A 6 strain,CVA6）衣殼蛋白VP1,并制備其抗血清。方法合成經(jīng)密碼子優(yōu)化的CVA6-VP1全長(zhǎng)基因,克隆至原核表達(dá)載體pET-28a中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-VP1,轉(zhuǎn)化感受態(tài)E. coli BL21（DE3）,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,同時(shí)優(yōu)化IPTG終濃度（0. 1、0. 2、0. 3、0. 5 mmol/L）、誘導(dǎo)溫度（15、20、25、30℃）及誘導(dǎo)時(shí)間（6、8、12、16 h）。表達(dá)產(chǎn)物采用Ni-NTA柱親和層析純化,將純化重組蛋白免疫新西蘭兔,制備VP1抗血清,微量細(xì)胞病變法檢測(cè)血清抗體效價(jià)。結(jié)果重組質(zhì)粒p ET-28a-VP1經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,構(gòu)建正確。重組蛋白最適誘導(dǎo)條件為:IPTG終濃度為0. 3 mmol/L,誘導(dǎo)溫度為15℃,誘導(dǎo)時(shí)間為12 h。重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約34 000,于上清和包涵體中均有表達(dá),純化后純度可達(dá)95%以上。兔血清效價(jià)均> 1∶8,呈陽(yáng)性。結(jié)論成功于原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)了可溶性CVA6-VP1蛋白,且獲得效價(jià)較高的抗血清。 

【文章來源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019,32(02)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 載體、菌株、毒株及細(xì)胞
    1.2主要試劑及儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
        1.5.1 IPTG濃度的優(yōu)化
        1.5.2 誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        1.5.3 誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化
    1.6 最適條件的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.7 目的蛋白的純化
    1.8 抗血清的制備
    1.9 中和抗體效價(jià)的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.2 目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.2.1 IPTG濃度的優(yōu)化
        2.2.2 誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        2.2.3 誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化
    2.3 最適條件誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
    2.4 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.5 中和抗體效價(jià)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3617320