目的:體外分析環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷是否（cGMP）通過(guò)cGMP依賴(lài)性蛋白激酶（cGK）調(diào)控人纖溶酶原激活物抑制劑2（PAI-2）基因啟動(dòng)子活性,闡明PAI-2基因表達(dá)的分子調(diào)控機(jī)制。方法:構(gòu)建cGK的真核過(guò)表達(dá)載體及其小干擾RNA（siRNA）敲減體系,以及PAI-2基因啟動(dòng)子缺失突變序列雙螢光素酶報(bào)告載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HPASMCs）,在可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶（sGC）特異性刺激劑BAY 41-2272處理前后,real-time PCR檢測(cè)PKG1（cGK編碼基因）和PAI-2基因的mRNA水平。結(jié)果:cGK過(guò)表達(dá)能顯著上調(diào)細(xì)胞內(nèi)PKG1的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平,cGK siRNA則能顯著降低其表達(dá)（P<0.01）;BAY 41-2272處理HPASMCs后,PKG1基因和PAI-2基因的mRNA水平均明顯升高,而cGK siRNA則能抑制該上調(diào)作用（P<0.01）;雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示,cGK過(guò)表達(dá)顯著上調(diào)PAI-2基因啟動(dòng)子活性,而cGK敲減組其活性與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;BAY 41-2272處理后PAI-2基因啟動(dòng)子缺失突變體PAI-2-Pr... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病理生理雜志. 2019,35(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和細(xì)胞處理
        2.3 PAI-2啟動(dòng)子的克隆
        2.4 細(xì)胞總RNA提取和RT-PCR
        2.5 Real-time PCR
        2.6 細(xì)胞總蛋白提取和Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.7 雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié) 果
    1 cGK過(guò)表達(dá)和敲減體系驗(yàn)證
    2 cGMP對(duì)PAI-2基因表達(dá)的調(diào)控依賴(lài)于cGK
    3 cGMP通過(guò)cGK調(diào)控PAI-2基因啟動(dòng)子活性
    4 PAI-2轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-1 000～-800 bp為轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)鍵位點(diǎn)
討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 耿德玉,原媛,郭華榮.  科技資訊. 2012(21)



本文編號(hào)：3616480