目的:采用酵母雙雜交技術,篩選PRR11的相互作用蛋白,為深入研究其分子行為機制奠定基礎。方法:構建用于酵母雙雜交篩選的PRR11誘餌質粒并檢測其自激活作用,根據(jù)結果進一步構建突變體獲得具有較低自激活作用的突變體。對人胎腦cDNA文庫進行篩選,獲得初始陽性克隆。通過LacZ報告基因檢測、回轉驗證、陽性克隆測序及BLAST序列比對分析,排除假陽性克隆和重復克隆,確定PRR11的候選相互作用蛋白。結果:PRR11具有自激活作用,構建了一個較低自激活作用的PRR11突變體。通過酵母雙雜交篩選,獲得102個初始陽性克隆轉化子。經(jīng)LacZ報告基因檢測,將陽性克隆鎖定至39個。通過測序和序列比對分析,證實這39個克隆屬于編碼15種不同蛋白的基因。最終有RNF41等4個蛋白通過回轉驗證。結論:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潛在相互作用蛋白。 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學學報. 2019,44(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 誘餌載體的構建和鑒定
        1.2.2 PRR11及其突變體自激活檢測
        1.2.3 篩選文庫用3-AT濃度確定
        1.2.4 酵母雙雜交文庫篩選
        1.2.5陽性克隆鑒定
        1.2.6 酵母陽性克隆DNA提取和測序比對
        1.2.7 陽性克隆回轉驗證
2 結果
    2.1 誘餌載體的構建
    2.2 重組誘餌蛋白自激活檢測和功能檢測
    2.3 PRR11突變體構建及自激活檢測
    2.4 文庫篩選和陽性克隆鑒定
3 討論



本文編號：3598553