目的:采用酵母雙雜交技術(shù),篩選PRR11的相互作用蛋白,為深入研究其分子行為機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建用于酵母雙雜交篩選的PRR11誘餌質(zhì)粒并檢測(cè)其自激活作用,根據(jù)結(jié)果進(jìn)一步構(gòu)建突變體獲得具有較低自激活作用的突變體。對(duì)人胎腦cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選,獲得初始陽(yáng)性克隆。通過(guò)LacZ報(bào)告基因檢測(cè)、回轉(zhuǎn)驗(yàn)證、陽(yáng)性克隆測(cè)序及BLAST序列比對(duì)分析,排除假陽(yáng)性克隆和重復(fù)克隆,確定PRR11的候選相互作用蛋白。結(jié)果:PRR11具有自激活作用,構(gòu)建了一個(gè)較低自激活作用的PRR11突變體。通過(guò)酵母雙雜交篩選,獲得102個(gè)初始陽(yáng)性克隆轉(zhuǎn)化子。經(jīng)LacZ報(bào)告基因檢測(cè),將陽(yáng)性克隆鎖定至39個(gè)。通過(guò)測(cè)序和序列比對(duì)分析,證實(shí)這39個(gè)克隆屬于編碼15種不同蛋白的基因。最終有RNF41等4個(gè)蛋白通過(guò)回轉(zhuǎn)驗(yàn)證。結(jié)論:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潛在相互作用蛋白。 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,44(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 誘餌載體的構(gòu)建和鑒定
        1.2.2 PRR11及其突變體自激活檢測(cè)
        1.2.3 篩選文庫(kù)用3-AT濃度確定
        1.2.4 酵母雙雜交文庫(kù)篩選
        1.2.5陽(yáng)性克隆鑒定
        1.2.6 酵母陽(yáng)性克隆DNA提取和測(cè)序比對(duì)
        1.2.7 陽(yáng)性克隆回轉(zhuǎn)驗(yàn)證
2 結(jié)果
    2.1 誘餌載體的構(gòu)建
    2.2 重組誘餌蛋白自激活檢測(cè)和功能檢測(cè)
    2.3 PRR11突變體構(gòu)建及自激活檢測(cè)
    2.4 文庫(kù)篩選和陽(yáng)性克隆鑒定
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