背景與目的 隨著人類基因組序列草圖的完成,基因組學(xué)研究的廣泛開展,基因表達調(diào)控研究已經(jīng)逐漸從單個基因點、線式的調(diào)控拓展到立體層面上多基因、基因簇以至整個基因組的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在遺傳調(diào)控過程中,反式作用因子與順式作用元件間的相互作用是構(gòu)成基因表達調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)。 核基質(zhì)附著區(qū)（Matrix attachment regions,MARs）是真核生物染色質(zhì)中可以與核基質(zhì)（Nuclear matrix,NM）蛋白結(jié)合的一段DNA序列。它能使染色質(zhì)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu),并與真核基因組中其它調(diào)控元件以及反式作用因子一起調(diào)節(jié)DNA復(fù)制、RNA合成和hnRNA加工等過程,在基因表達調(diào)控中起重要作用。此外,在基因工程研究中,引入MAR能消除外源基因?qū)φ衔稽c的敏感性,從而消除插入位點周圍調(diào)控元件的影響,提高轉(zhuǎn)染細胞外源基因表達的效率和穩(wěn)定性,為克服轉(zhuǎn)基因沉默或基因治療提供新的途徑。目前S/MARtDB庫中,人源的MARs僅有117個,其功能尚未全知,而人類基因組中大量的MARs有待深入研究。因此,本研究擬從人基因組中分離隨機的MARs元件,構(gòu)建成隨機MARs庫;利用體外結(jié)合實驗篩選出具有MARs特性的... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人PUC19一MAR的構(gòu)建策略Figure1TheeonstiuctionsrtategyofPUC19.M人RPlasmid2.MAR冶的平端化和純化

2.MAF污的分離上述分離獲得的細胞核經(jīng)DNasel、高鹽(4m。比NaCI)及蛋白酶消化處理后，分離、抽提出大量的隨機MARS片段，經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖2所示:隨機MA]七片段大小不均一，在10b0p一巧kb之間，呈彌散分布。

瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果(見圖4)顯示:平端化后MARS同填平前的片段M川七一樣，大小不均一，在10b0p一15kb之間，呈彌散分布。l:入DNAE/eoRI+Hind111Marker;2:filledMARs圖4平端化后MARS瓊脂糖凝膠電泳Figure4ElectroPhoesrisoffilledMARSby銘arosegel三、MAP兇的克隆與鑒定1.MARs的克隆應(yīng)用p一半乳糖昔酶選擇系統(tǒng)篩選出陽性克隆重組子，共獲得238個白色單克隆，即構(gòu)成含238個克隆的隨機MARs庫。2.MARs克隆的鑒定從含有238個單克隆的MARs庫中，隨機挑取的18個MARs單克隆(JMr/A一J和JM回a.h)培養(yǎng)過夜菌，抽提其質(zhì)粒，并經(jīng)限制性內(nèi)切酶EocR卜Hindm酶切后，瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果見圖5、圖6。從圖中可以看出

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人T細胞基因組隨機MARs的分離、克隆及序列分析[J]. 毛瓊國,白云,張波,黃鋼,王燕,代佳平.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2004(15)
[2]6個植物MARs序列的ARS功能鑒定與分析[J]. 李宏,楊予濤,張可偉,鄭成超.  科學(xué)通報. 2003(24)



本文編號：3599783