人類繼發(fā)現(xiàn)紅細胞血型之后,至20世紀末,已發(fā)現(xiàn)29個血型系統(tǒng),600多種抗原決定簇。血型糖蛋白A（GPA）和血型糖蛋白B（GPB）是人紅細胞膜蛋白的主要成分,也是紅細胞分化的重要分子標志。它們共同構(gòu)成了紅細胞膜上MNSs血型系統(tǒng)。GPA和GPB基因均位于第4號染色體上,其基因結(jié)構(gòu)同源性達60%,本研究通過紅細胞免疫,獲得4株抗M單抗、1株抗N單抗及3株重要的抗GPA/GPB單抗,為今后MNSs血型系統(tǒng)的研究、鑒定及利用其制備自身紅細胞凝集實驗中的雙功能抗體打下了的基礎(chǔ)。同時本研究還通過RT-PCR的方法,從以上獲得的抗GPA/GPB的單抗中成功擴增出其重鏈及輕鏈的可變區(qū),通過短肽連接獲得了相應(yīng)的單鏈抗體,該抗體能與所有類型的紅細胞結(jié)合。在此單鏈抗體的基礎(chǔ)上,本研究還利用了重組DNA技術(shù)將鏈霉親和素與之進行原核表達,所獲得的融合蛋白一方面能與紅細胞結(jié)合,另一方面能與鏈霉親和素結(jié)合,再在生物素標記的抗體的存在下,可以介導(dǎo)產(chǎn)生肉眼可見的紅細胞凝集反應(yīng)。通過血凝反應(yīng)來判定特異性抗體或抗原的陽性或陰性。最終獲得的單鏈抗體與鏈霉親和素的融合蛋白,作為雙功能抗體起到中間橋梁作用,將自身紅細胞凝集反應(yīng)... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

自身紅細胞凝集反應(yīng)示意圖

分子中兩個 V 區(qū)（VH/VL 或 VH/VK）共同特異性�？偟恼f來，接合在一起的兩個 V 區(qū)位點[25]，雖然有單個 V 區(qū)能接合抗體的例子抗原間的特異性緊密結(jié)合能力顯著提高。體的某些優(yōu)點在另一方面也可能是缺點。如與雙價抗體比較，它們與靶細胞表面抗原的于只有抗體的 V 區(qū)，免疫原性要比原來的 M整抗體的半壽周期短，很快從血液中清除，，實驗證明，完整的抗體基因雖然能表達成折疊，裝配和糖基化成有活性的抗體分子[26]體的某些缺點是可以克服的。如在嵌合抗體菌中能夠正確地裝配 Fab 和 Fv 片段，并保留圖 2 抗體及單鏈抗體示意圖

-PAGE 電泳分離后將蛋白轉(zhuǎn)印到 PVDF 膜上，入 myc 標準抗體作為一抗，以 HRP 標記的羊曝光結(jié)果如下（圖 2.7）：檢測2 332kd圖2.7 ScFv 融合蛋白WesteFig2.7 Western blot analysis1. pBAD/gIIIA- ScFv supe2. pBAD/gIIIA- ScFv bact3. pBAD/gIIIA blank bact1 2 3 4

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3591857