人類繼發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞血型之后,至20世紀(jì)末,已發(fā)現(xiàn)29個(gè)血型系統(tǒng),600多種抗原決定簇。血型糖蛋白A（GPA）和血型糖蛋白B（GPB）是人紅細(xì)胞膜蛋白的主要成分,也是紅細(xì)胞分化的重要分子標(biāo)志。它們共同構(gòu)成了紅細(xì)胞膜上MNSs血型系統(tǒng)。GPA和GPB基因均位于第4號(hào)染色體上,其基因結(jié)構(gòu)同源性達(dá)60%,本研究通過紅細(xì)胞免疫,獲得4株抗M單抗、1株抗N單抗及3株重要的抗GPA/GPB單抗,為今后MNSs血型系統(tǒng)的研究、鑒定及利用其制備自身紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)中的雙功能抗體打下了的基礎(chǔ)。同時(shí)本研究還通過RT-PCR的方法,從以上獲得的抗GPA/GPB的單抗中成功擴(kuò)增出其重鏈及輕鏈的可變區(qū),通過短肽連接獲得了相應(yīng)的單鏈抗體,該抗體能與所有類型的紅細(xì)胞結(jié)合。在此單鏈抗體的基礎(chǔ)上,本研究還利用了重組DNA技術(shù)將鏈霉親和素與之進(jìn)行原核表達(dá),所獲得的融合蛋白一方面能與紅細(xì)胞結(jié)合,另一方面能與鏈霉親和素結(jié)合,再在生物素標(biāo)記的抗體的存在下,可以介導(dǎo)產(chǎn)生肉眼可見的紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。通過血凝反應(yīng)來判定特異性抗體或抗原的陽性或陰性。最終獲得的單鏈抗體與鏈霉親和素的融合蛋白,作為雙功能抗體起到中間橋梁作用,將自身紅細(xì)胞凝集反應(yīng)... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

自身紅細(xì)胞凝集反應(yīng)示意圖

分子中兩個(gè) V 區(qū)（VH/VL 或 VH/VK）共同特異性�？偟恼f來，接合在一起的兩個(gè) V 區(qū)位點(diǎn)[25]，雖然有單個(gè) V 區(qū)能接合抗體的例子抗原間的特異性緊密結(jié)合能力顯著提高。體的某些優(yōu)點(diǎn)在另一方面也可能是缺點(diǎn)。如與雙價(jià)抗體比較，它們與靶細(xì)胞表面抗原的于只有抗體的 V 區(qū)，免疫原性要比原來的 M整抗體的半壽周期短，很快從血液中清除，，實(shí)驗(yàn)證明，完整的抗體基因雖然能表達(dá)成折疊，裝配和糖基化成有活性的抗體分子[26]體的某些缺點(diǎn)是可以克服的。如在嵌合抗體菌中能夠正確地裝配 Fab 和 Fv 片段，并保留圖 2 抗體及單鏈抗體示意圖

-PAGE 電泳分離后將蛋白轉(zhuǎn)印到 PVDF 膜上，入 myc 標(biāo)準(zhǔn)抗體作為一抗，以 HRP 標(biāo)記的羊曝光結(jié)果如下（圖 2.7）：檢測2 332kd圖2.7 ScFv 融合蛋白WesteFig2.7 Western blot analysis1. pBAD/gIIIA- ScFv supe2. pBAD/gIIIA- ScFv bact3. pBAD/gIIIA blank bact1 2 3 4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3591857