視網(wǎng)膜是視神經(jīng)系統(tǒng)中的一個(gè)重要的組成部分，視網(wǎng)膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)都來源于神經(jīng)管，因此視網(wǎng)膜的許多發(fā)育特征可以反映出腦發(fā)育的一些重要特點(diǎn)，研究視網(wǎng)膜發(fā)育是研究腦發(fā)育的一個(gè)重要窗口。視網(wǎng)膜病變也是致盲的一個(gè)重要原因，是影響人類健康的危害之一，如由視網(wǎng)膜光感受細(xì)胞內(nèi)的基因突變?cè)斐傻倪z傳性視網(wǎng)膜色素變性等。研究視網(wǎng)膜發(fā)育和功能特性，特別是光感受細(xì)胞的特性，將為這些疾病的研究和進(jìn)一步治療奠定基礎(chǔ)。深入這一領(lǐng)域的研究，動(dòng)物模型是直接和有效的，最常用的就是轉(zhuǎn)基因小鼠。小鼠與人在基因組結(jié)構(gòu)和基因功能方面有極強(qiáng)的相似性，同時(shí)繁殖快、飼養(yǎng)費(fèi)用較低，因此轉(zhuǎn)基因小鼠成為目前體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究體系的最優(yōu)選的方法。本實(shí)驗(yàn)的目的旨在制作出視網(wǎng)膜的視感受細(xì)胞有效表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，用來標(biāo)記視網(wǎng)膜，研究視網(wǎng)膜發(fā)育和用作視網(wǎng)膜移植實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)體系。我們從基因組中擴(kuò)增出視蛋白基因5’端上游2.1kb的調(diào)控序列片段，該序列能夠特異而有效的調(diào)控目的基因在視網(wǎng)膜中表達(dá)。進(jìn)而將這一調(diào)控區(qū)與含有綠色熒光蛋白cDNA的真核表達(dá)載體pEGFP-C1進(jìn)行重組，獲得了調(diào)控綠色熒光蛋白在視網(wǎng)膜內(nèi)表達(dá)的真核表達(dá)載體，命名為ROP-GFP。將RO... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PeR結(jié)果

.PeR結(jié)果。M示Marker圖3.PeR產(chǎn)物回收后的結(jié)果同)目的基因的連接:連接后共有16處白斑，分別接種節(jié)青霉素(1pl/ml)的LB培養(yǎng)基中擴(kuò)增，分別編號(hào)。但第1號(hào)菌擴(kuò)增失敗。將2一16號(hào)菌回收質(zhì)粒，編粒。連接后形成的中間質(zhì)粒命為ROP一T。酶切鑒定結(jié)果:5、6、10號(hào)質(zhì)粒EcoRI單酶切后結(jié)期相符(如圖4)。對(duì)可能連接正確的5、6、10號(hào)質(zhì)酶切，酶切后所得片段大小也都與預(yù)期相符(圖5和

ZO27bP圖2.PeR結(jié)果。M示Marker圖3.PeR產(chǎn)物回收后的結(jié)果(后同)(三)目的基因的連接:連接后共有16處白斑，分別接種于sml加有氨節(jié)青霉素(1pl/ml)的LB培養(yǎng)基中擴(kuò)增，分別編號(hào)為1一16號(hào)菌。但第1號(hào)菌擴(kuò)增失敗。將2一16號(hào)菌回收質(zhì)粒，編號(hào)2一16號(hào)質(zhì)粒。連接后形成的中間質(zhì)粒命為ROP一T。(四)酶切鑒定結(jié)果:5、6、10號(hào)質(zhì)粒EcoRI單酶切后結(jié)果大小與預(yù)期相符(如圖4)。對(duì)可能連接正確的5、6、10號(hào)質(zhì)粒作進(jìn)一步酶切，酶切后所得片段大小也都與預(yù)期相符(圖5和圖6)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]視網(wǎng)膜色素變性分子遺傳學(xué)研究現(xiàn)狀[J]. 熊世紅,趙堪興,王立.  國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè). 2000(02)



本文編號(hào)：3591445