利用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）的方法分析了強(qiáng)毒株人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv和減毒株卡介苗（BCG）感染肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（AECⅡ）株A549中微小RNA-146a （miR-146a）的表達(dá)情況;構(gòu)建miR-146a腺病毒過表達(dá)載體,分析在結(jié)核分枝桿菌（Mtb）感染A549細(xì)胞中,過表達(dá)miR-146a對toll樣受體（TLRs）信號通路及炎癥因子的表達(dá)調(diào)控作用.結(jié)果表明, Mtb感染可引起A549細(xì)胞中miR-146a表達(dá)上調(diào);當(dāng)在A549細(xì)胞中過表達(dá)miR-146a時,在BCG感染組中TLR2的表達(dá)表現(xiàn)為感染后顯著抑制, H37Rv感染組中TLR2表達(dá)差異不顯著; TLR4在BCG和H37Rv感染組中均表現(xiàn)為顯著下調(diào).過表達(dá)miR-146a時,在BCG和H37Rv感染組中對TLR信號通路的下游分子髓樣分化因子（MyD88）、TNF受體關(guān)聯(lián)因子6 （TRAF6）、核因子κB （NF-κB）和促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL）-6的表達(dá)均表現(xiàn)為感染后的抑制作用,而IL-8表達(dá)影響不明顯.說明在AECⅡ細(xì)胞抗Mtb感染過程中, miR-146a負(fù)調(diào)... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019,55(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

小鼠U6啟動子miR-146a的擴(kuò)增

2.2.2過表達(dá)miR-146a腺病毒的驗(yàn)證利用過表達(dá)miR-146a腺病毒分別感染293T和A549,提取細(xì)胞總RNA,用miR-146a特異性頸環(huán)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,使用miR-146a特異性引物進(jìn)行qPCR,檢測miR-146a的表達(dá)量.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,過表達(dá)miR-146a腺病毒感染293T和A549時,空白腺病毒中細(xì)胞表達(dá)水平為0.35和0.04,miR-146aM:標(biāo)記物;1、2泳道:模板稀釋100倍;3、4泳道:模板稀釋10倍;5、6泳道:模板圖1小鼠U6啟動子miR-146a的擴(kuò)增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:標(biāo)記物;1~10泳道:10個轉(zhuǎn)化Blunt-U6-miR-146a單克隆的PCR圖2pEASY-Blunt-U6-miR-146a連接產(chǎn)物的PCR鑒定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct圖3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段測序結(jié)果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:標(biāo)記物;1~7泳道:7個轉(zhuǎn)化穿梭載體pacAd5K-NpA-U6-miR-146a單克隆載體的SpeⅠ和XhoⅠ雙酶切圖4穿梭載體pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的雙酶切鑒定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5個轉(zhuǎn)化單克隆腺病毒骨架載體Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ單酶切鑒定圖5骨架載體Ad-E3-RSV-GFP的單酶切鑒定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龍，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染中的免疫調(diào)控作用223

2.2.2過表達(dá)miR-146a腺病毒的驗(yàn)證利用過表達(dá)miR-146a腺病毒分別感染293T和A549,提取細(xì)胞總RNA,用miR-146a特異性頸環(huán)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,使用miR-146a特異性引物進(jìn)行qPCR,檢測miR-146a的表達(dá)量.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,過表達(dá)miR-146a腺病毒感染293T和A549時,空白腺病毒中細(xì)胞表達(dá)水平為0.35和0.04,miR-146aM:標(biāo)記物;1、2泳道:模板稀釋100倍;3、4泳道:模板稀釋10倍;5、6泳道:模板圖1小鼠U6啟動子miR-146a的擴(kuò)增Fig.1AmplificationofmouseU6promotermiR-146aM:標(biāo)記物;1~10泳道:10個轉(zhuǎn)化Blunt-U6-miR-146a單克隆的PCR圖2pEASY-Blunt-U6-miR-146a連接產(chǎn)物的PCR鑒定Fig.2PCRidentificationofpEASY-Blunt-U6-miR-146aligationproduct圖3pEASY-Blunt-U6-miR-146a片段測序結(jié)果Fig.3SequencingresultsofpEASY-Blunt-U6-miR-146afragmentM:標(biāo)記物;1~7泳道:7個轉(zhuǎn)化穿梭載體pacAd5K-NpA-U6-miR-146a單克隆載體的SpeⅠ和XhoⅠ雙酶切圖4穿梭載體pacAd5K-NpA-U6-miR-146a的雙酶切鑒定Fig.4IdentificationofshuttlevectorpacAd5K-NpA-U6-miR-146abydoubleenzymedigestion1、3、5、7、9泳道:5個轉(zhuǎn)化單克隆腺病毒骨架載體Ad-E3-RSV-GFP;2、4、6、8、10泳道:其PacⅠ單酶切鑒定圖5骨架載體Ad-E3-RSV-GFP的單酶切鑒定Fig.5SingledigestionidentificationofskeletonvectorAd-E3-RSV-GFP程龍，等：miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染中的免疫調(diào)控作用223

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蘭州市大氣污染對人體呼吸系統(tǒng)疾病的影響[J]. 田瑜,王金艷,李旭,魏林波,李艷,馮凱悅.  蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(03)
[2]β-咔啉-3-羧酸酯二聚體的合成及體外抗腫瘤活性研究[J]. 秦文娟,谷紅玲,馬瑞月,杜宏濤,王俊儒.  蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[3]疫苗有效性具有階段性特征的傳染病模型的全局穩(wěn)定性[J]. 宋修朝,李建全,尹忠海,李炳杰.  蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(03)
[4]miRNA-140過表達(dá)腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J]. 賀鵬,段莉.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(01)
[5]腺病毒介導(dǎo)miRNA-29a過表達(dá)抑制人胃癌細(xì)胞的增殖[J]. 劉志鵬,王宗華,盧斌,胡春燕,李學(xué)成,鄒利全,張方征,陳陵.  中國腫瘤生物治療雜志. 2013(03)



本文編號：3592020