本文關鍵詞：硫化氫通過上調SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導HT22細胞衰老，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)是否可以通過上調SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導HT22細胞衰老。方法:Cell counting Kit-8(CCK8)法檢測細胞的活性;β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、臺盼藍計數求細胞生長曲線及Western Blotting檢測細胞衰老相關蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白的表達評價HT22細胞衰老;Western Blotting檢測沉默信息調節(jié)因子1(Silent mating type information regulation homolog 1,SIRT1)蛋白的表達;羅丹明123(Rh123)染色熒光顯微鏡照相檢測細胞線粒體膜電位;Annexin V/PI染色流式細胞儀和Hoechst33258染色檢測細胞凋亡。結果:1.Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理HT22細胞48h后,SA-β-Gal陽性細胞明顯增加,衰老負性調控蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表達明顯上調,細胞生長曲線明顯呈下降趨勢,表明Hcy能誘導HT22細胞衰老。2.Na HS(H2S供體,100、200、400μmol/L)可呈濃度依賴性地抑制Hcy(5 mmol/L,48 h)誘導HT22細胞SA-β-Gal染色陽性細胞增加,P16INK4a、P21CIPL蛋白表達上調及細胞生長曲線下降趨勢,表明H2S可拮抗Hcy誘導HT22細胞衰老。3.Hcy(2.5、5、10mmol/L)處理HT22細胞48小時后,細胞SIRT1蛋白的表達呈濃度依賴性下調,表明Hcy可抑制HT22細胞SIRT1蛋白的表達。4.Na HS(100、200、400μmol/L,48h)可濃度依賴性地上調HT22細胞SIRT1蛋白的表達,而且可逆轉Hcy(5 mmol/L)處理HT22細胞后SIRT1蛋白表達的下調作用,表明H2S可上調HT22細胞SIRT1的表達。5.SIRT1抑制劑Sirtinol(15μmol/L)可逆轉Na HS(400μmol/L)對Hcy(5 mmol/L,48 h)增加HT22細胞中SA-β-Gal染色陽性細胞比例、上調衰老相關關鍵蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表達以及促進細胞生長曲線下降趨勢的阻斷作用,表明SIRT1對H2S抑制Hcy誘導HT22細胞衰老具有介導作用。結論:H2S通過上調SIRT1拮抗Hcy誘導HT22細胞衰老。
【關鍵詞】：硫化氫 同型半胱氨酸 細胞衰老 SIRT1
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R339.38
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 主要英文縮略語索引9-11
• 第一章 緒論11-15
• 第二章 材料和方法15-23
• 2.1 主要實驗儀器15-16
• 2.2 主要實驗試劑16-17
• 2.3 試劑的制備17-19
• 2.4 實驗方法19-21
• 2.5 統計學處理21-23
• 第三章 實驗結果23-29
• 3.1 Hcy誘導HT22細胞的衰老23-24
• 3.2 H_2S拮抗Hcy誘導HT22細胞衰老24-25
• 3.3 Hcy抑制HT22細胞SIRT1的表達25
• 3.4 H_2S上調HT22細胞SIRT1的表達25-26
• 3.5 SIRT1抑制劑(Sirtinol)阻止H2S抗Hcy誘導的HT22細胞衰老26-27
• 3.6 SIRT1抑制劑(Sirtinol)逆轉H2S抗Hcy誘導HT22細胞凋亡27-29
• 第四章 討論29-33
• 第五章 實驗結論33-34
• 參考文獻34-38
• 文獻綜述38-46
• 參考文獻43-46
• 作者攻讀學位期間的科研成果46-47
• 致謝47

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本文編號：357937