目的：研究ZS株弓形蟲表膜抗原P22編碼基因的克隆和表達。 方法：從ZS株弓形蟲基因組中擴增出P22編碼基因的位于開放閱讀框架（ORF）中的一長496bp的片段，限制性內切酶Pst Ⅰ和BgL Ⅱ雙酶切該片段，膠回收純化，插入表達質粒載體pThioHisA，B，C多克隆位點，構建原核質粒重組體pThioHisA，B，C/P22，并轉化E.coli Top 10，篩選陽性克隆，以限制性酶切分析及測序鑒定后，以IPTG進行誘導，在E.coli Top 10中表達，用SDS—PAGE觀察重組蛋白表達情況，應用Western-blot分析重組抗原的活性，并純化表達產物。同時擴增P22編碼基因ORF的全長561bp片段，經Pst Ⅰ、Xba Ⅰ雙酶切后，定向克隆于質粒pBudCE 4.1，構建真核重組重組表達質粒pBudCE 4.1/P22，通過脂質體介導轉染入小鼠巨噬細胞RAW264.7，以RT-PCR方法鑒定目的基因在巨噬細胞中的表達。 結果： 1．從弓形蟲ZS株基因組中擴增出P22編碼基因的一長496 bp，另一長561bp的片段，并成功構建含P22編碼基因的原核質粒重組... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學福建省

【文章頁數】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

22編碼基因片段PCR產M:DNA標準分子量(DLZO00)1.陰性對照F19I(lentifieatiollofl)CRpro〔

2.重組子pThiollisA，B，C/p22的鑒定分子量(湘1)1.陰性對照2.3.垂組成功質sA，日，C/I，22雙酶切9.2.101一r一1if](、at1011()f廠〔·(orz{。irl。日ltl)la:川(}Marker1.rlegatzve(一02:tl·0123.Reco，B，C/P22digestedbypstl、BgL11A，B，C/P22，用該質粒通用引物TrxR、公!d完成測序)。測)J-i結果如I，GAGCTCG八q八且刃江C二白已衛(wèi)遷工腸人皿CAACGAAGACTGTTG了、TGCACCCTCCAGC飛’AACCAI，CAGTCCCAGTGGCGAAGGTGCGAGGAAGTTGACGACTGTCCTTCCAGGCCGCGAAAGGTCCTGCTACC1’ACACACTGGTTCTCTGT下入CAAG『rGCGTTGCCGAAGTTCI認GCGCTCCGACGCCTAAAGACTG’，’’

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本文編號：3566300