神經(jīng)發(fā)育的研究一直是神經(jīng)科學(xué)中的一個(gè)重要課題,目前在細(xì)胞層次的發(fā)育研究成為一個(gè)熱點(diǎn),主要是利用膜片鉗、免疫組化、熒光成像等方法研究不同因子對(duì)發(fā)育過程中神經(jīng)元形態(tài)和功能的影響。由于無損得長(zhǎng)期記錄神經(jīng)元電生理活動(dòng)比較困難,目前對(duì)于神經(jīng)元電生理發(fā)育過程研究較少。本文利用多電極陣列系統(tǒng),結(jié)合光學(xué)成像方法,實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)發(fā)育過程中形態(tài)學(xué)以及電生理實(shí)時(shí)無損檢測(cè)。主要研究結(jié)果如下:在實(shí)驗(yàn)室已有的基礎(chǔ)上摸索、改進(jìn)了神經(jīng)元培養(yǎng)條件,獲得了較為穩(wěn)定的神經(jīng)元培養(yǎng)方法,研究了神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)學(xué)發(fā)育變化。結(jié)果表明,體外培養(yǎng)神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的建立與神經(jīng)元的組織來源、培養(yǎng)用液的配置和保存等細(xì)節(jié)問題關(guān)系密切;在培養(yǎng)過程中存在神經(jīng)元的遷移和消亡。利用MEA系統(tǒng)在無損的情況下連續(xù)記錄網(wǎng)絡(luò)的自發(fā)放電,從而研究了網(wǎng)絡(luò)的電生理發(fā)育過程。結(jié)果表明,體外培養(yǎng)的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)放電具有多樣性;發(fā)育過程中網(wǎng)絡(luò)放電的頻率、幅度和鋒電位時(shí)間間隔（ISI）在第二周到第三周有較大的變化,第三周到第四周相對(duì)平穩(wěn),放電頻率和幅度第四周以后逐漸降低。說明體外培養(yǎng)的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)在第三周發(fā)育成熟,且比較穩(wěn)定,四周以后逐漸消亡。利用鈣波實(shí)驗(yàn)、FM1-43染色實(shí)驗(yàn)... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

胚胎期不同階段海馬神經(jīng)元發(fā)育過程

根據(jù)神經(jīng)元在腦區(qū)的發(fā)生時(shí)間，大鼠約在胚胎發(fā)育第 15 天(E15)出現(xiàn)錐體神培養(yǎng)的細(xì)胞容易結(jié)團(tuán)成簇，單個(gè)神經(jīng)元較少；胎齡 17~20 天的大鼠錐體神經(jīng)已基本完成(圖 1.1)[21]，這時(shí)的海馬組織易于分離，腦膜也易于去除，神經(jīng)膠量仍然相當(dāng)少；齒狀回顆粒細(xì)胞也未出現(xiàn)。而大鼠出生后第一天膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)培養(yǎng)的細(xì)胞多為膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元成活率不高。所以胎齡 18 天左右的胚胎馬神經(jīng)元的分離和培養(yǎng)，且體外培養(yǎng)成活率也最高，可達(dá) 80~90%。2) 鼠齡的確定：對(duì)于大鼠孕齡的判斷，有的學(xué)者認(rèn)為精子檢測(cè)陽性的當(dāng)天為胚胎 0 天(E0)，者認(rèn)為這是第一天(E1)。胎齡的確定除了根據(jù)孕齡外，還可結(jié)合胎鼠的長(zhǎng)度鼠從頭部到臀部的長(zhǎng)度，E17~E20 胎鼠的長(zhǎng)度大約為 20~30 mm。用于海馬養(yǎng)的理想胎齡是 E18，胎鼠身長(zhǎng)約為 25 mm[41]。而胎鼠從孕鼠子宮取出之后正的胎齡才能基本得以確定，利用本實(shí)驗(yàn)室微型 X-ray 系統(tǒng)，對(duì)孕鼠進(jìn)行成規(guī)律，即可確定胎鼠大小。對(duì)孕齡 18 天左右的孕鼠進(jìn)行 X-ray 成像時(shí)，可以胎鼠的脊柱及胎鼠輪廓，胎鼠身長(zhǎng)約 25 mm；而 21 天左右胎鼠脊柱清晰， 35 mm 左右(圖 2.1，2.2)。

胎齡20天Wistar大鼠X-ray圖片(標(biāo)尺為10mm)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]胚胎大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法研究[J]. 呂欣,王楠,霍思維,張尚立,解琨,苗俊英.  中國(guó)生物工程雜志. 2004(01)
[2]大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的限制性細(xì)胞培養(yǎng)[J]. 石軍,張可成,蔡文琴.  中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2000(02)



本文編號(hào)：3553065