漢坦病毒是一種有囊膜、分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒，基因組由L、M、S三個(gè)片段構(gòu)成。L片段編碼病毒RNA聚合酶，M片段編碼囊膜糖蛋白G1和G2，S片段編碼核衣殼蛋白NP（簡(jiǎn)稱核蛋白）。囊膜糖蛋白上具有中和及血凝抗原位點(diǎn)，可誘導(dǎo)中和抗體和保護(hù)性細(xì)胞免疫反應(yīng)；核蛋白上雖無(wú)中和性抗原位點(diǎn)，但仍可誘導(dǎo)保護(hù)性細(xì)胞免疫。 血清學(xué)研究表明，漢坦病毒核蛋白具有很強(qiáng)的抗原性和免疫原性，病人對(duì)核蛋白的抗體應(yīng)答不僅出現(xiàn)早，且滴度高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，核蛋白N端約100個(gè)氨基酸大部分具有親水性，且能被病人、免疫動(dòng)物血清及許多單克隆抗體所識(shí)別，運(yùn)用缺失突變法表達(dá)的漢坦病毒核蛋白N端多肽保持了天然完整NP良好的抗原性和免疫原性，已用于腎綜合征出血熱和漢坦病毒肺綜合征的血清學(xué)診斷，但該抗原表位精確的一級(jí)結(jié)構(gòu)及其基因定位迄今尚未明確。噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù)的出現(xiàn)為大量快速地篩檢基因——多肽文庫(kù)提供了可能。 本研究首先采用噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù)建立了漢坦病毒代表株漢灘病毒76-118株S基因隨機(jī)多肽片段的噬菌體文庫(kù)，用單克隆抗體對(duì)其進(jìn)行篩檢，確定了漢灘病毒核蛋白的主要線性抗原表位，并在此基礎(chǔ)上。用pGEX融合蛋白表達(dá) 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖SA噬菌體表位文庫(kù)構(gòu)建與篩選示意圖

圖SB噬菌體表位文庫(kù)構(gòu)建與篩選示意圖

一l漢灘病毒S片段薈因的曲切回收Figl一1HTNV一5gene五5eut初thPSt1fro.pUC18一HTN一5andeolleetedLanel:入DNAHind111Marker(23130，9416，6557，4361，2322，2027，564bP)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用噬菌體肽庫(kù)技術(shù)對(duì)漢灘病毒核衣殼蛋白N端主要線性抗原位點(diǎn)的識(shí)別及其基因定位[J]. 白雪帆,黃長(zhǎng)形,汪毅,潘蕾,楊為松.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1998(06)
[2]漢灘病毒S片段基因cDNA 3′端非編碼區(qū)對(duì)核蛋白在大腸桿菌中表達(dá)的影響[J]. 黃長(zhǎng)形,楊為松,杭長(zhǎng)壽,白雪帆,李光玉,李新紅,孫永濤,張文彬.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1997(04)
[3]噬菌體表面表達(dá)技術(shù)及其在抗病毒研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀和前景[J]. 張英,李愛(ài)民.  病毒學(xué)報(bào). 1997(02)
[4]漢灘病毒核蛋白在大腸桿菌中高效表達(dá)[J]. 李新紅,楊為松,黃長(zhǎng)形,白雪帆,李光玉,張文彬.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1997(03)
[5]原核細(xì)胞表達(dá)的腎綜合征出血熱病毒核蛋白免疫原性及免疫保護(hù)作用的研究[J]. 黃長(zhǎng)形,李光玉,楊為松,杭長(zhǎng)壽,白雪帆,孫永濤,張文彬,李新紅.  中國(guó)病毒學(xué). 1996(03)
[6]腎綜合征出血熱病毒核蛋白在大腸桿菌中表達(dá)及其產(chǎn)物的初步應(yīng)用[J]. 黃長(zhǎng)形,李盈盈,楊為松,杭長(zhǎng)壽,白雪帆,尚高峰,張文彬.  中華傳染病雜志. 1996(01)
[7]漢灘病毒毒力標(biāo)志的建立[J]. 邱建明,宋干,杭長(zhǎng)壽,張全福,霍子威,桃樹(shù)元.  病毒學(xué)報(bào). 1995(04)
[8]重組桿狀病毒表達(dá)漢坦病毒結(jié)構(gòu)蛋白在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的免疫應(yīng)答[J]. 石曉宏,宋干,杭長(zhǎng)壽,霍子威,陳健纓.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1995(04)
[9]漢灘病毒核殼蛋白（NP）在桿狀病毒系統(tǒng)的表達(dá)及其免疫原性研究[J]. 石曉宏,杭長(zhǎng)壽,宋干.  病毒學(xué)報(bào). 1995(02)
[10]流行性出血熱病毒感染鼠的細(xì)胞毒T細(xì)胞功能中性紅比色分析法[J]. 詹發(fā)先,宋干,杭長(zhǎng)壽,李德新,黃永成.  病毒學(xué)報(bào). 1992(03)



本文編號(hào)：3552491