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硫氧還原蛋白融合表達(dá)載體的構(gòu)建與純化方法的初步研究

發(fā)布時(shí)間:2021-12-16 21:15
  前言 分子生物學(xué)技術(shù)作為新技術(shù)革命的重要組成部分涉及到生命科學(xué)研究領(lǐng)域的各個(gè)方面,在現(xiàn)代環(huán)境衛(wèi)生學(xué)的研究?jī)?nèi)容中,無(wú)法快速得到目的蛋白或多肽成為制約其發(fā)展的一項(xiàng)重要因素。利用蛋白質(zhì)表達(dá)技術(shù),快速、簡(jiǎn)便地進(jìn)行有關(guān)活性代謝產(chǎn)物的高效表達(dá)進(jìn)而研究其生物學(xué)功能和理化特性成為一種新的方法。其中融合蛋白表達(dá)技術(shù)由于容易實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)、純化步驟簡(jiǎn)便、產(chǎn)物多以活性形式存在而得到廣泛應(yīng)用,尤其在小分子多肽研究中受到親睞,為研究蛋白質(zhì)發(fā)揮作用機(jī)理的活性中間產(chǎn)物的理化性質(zhì)和生物學(xué)作用開(kāi)辟了新天地。 硫氧還原蛋白(Trx)是一種熱穩(wěn)定性蛋白分子伴侶,在多種情況下,可使異源蛋白質(zhì)正確的折疊,表現(xiàn)出全部生物學(xué)活性,具有的熱穩(wěn)定性?勺鳛榧兓疶rx融合蛋白的方式而倍受重視,但目前使用的載體表達(dá)效率不高,表達(dá)產(chǎn)物需要蛋白酶切割,并且其第38位為甲硫氨酸,是特異性裂解的酶切位點(diǎn),在使用溴化氰作定點(diǎn)切除時(shí),無(wú)法得到單一的目的片段產(chǎn)物而限制了其應(yīng)用。由于Trx具有分子較小,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,易于改造的特點(diǎn),本研究采用基因定點(diǎn)突變技術(shù),對(duì)其基因進(jìn)行了改造,構(gòu)建了新型硫氧還原蛋白載體并以線蟲(chóng)抗凝肽(ATP)為模型,對(duì)純化方法及... 

【文章來(lái)源】:中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】:45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 英文縮略語(yǔ)
四、 前言
五、 實(shí)驗(yàn)材料
六、 實(shí)驗(yàn)方法
七、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
八、 討論
九、 結(jié)論
十、 論文圖片
十一、 參考文獻(xiàn)
十二、 致謝
十三、 個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]ThioFusion表達(dá)系統(tǒng)──大腸桿菌中表達(dá)可溶性蛋白的重大突破[J]. 馬雪梅,黃秉仁,蔡良婉.  生命的化學(xué)(中國(guó)生物化學(xué)會(huì)通訊). 1995(03)



本文編號(hào):3538830

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