本文關(guān)鍵詞：提高大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)化為胰島樣細胞能力的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離、提取和培養(yǎng)。(2)探討損傷胰腺提取液和細胞生長因子對脂肪間充質(zhì)干細胞分化為胰島樣細胞的影響。方法:(1)無菌條件下通過手術(shù)獲取大鼠脂肪組織,用膠原酶消化法獲取脂肪間充質(zhì)干細胞,并通過胰蛋白酶消化法傳代細胞以達到純化的目的。(2)按對照組、藥物誘導組、混合誘導組和損傷胰腺提取液組的順序進行分組,各組加入不同的細胞誘導因子和損傷胰腺提取液對細胞進行誘導11d,誘導完畢后,于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化;用雙硫腙(STZ)染色鑒定胰島素陽性細胞;用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來比較高糖環(huán)境刺激前后各組胰島素分泌量的多少;通過免疫熒光染色和熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)來檢測相關(guān)基因的表達量。結(jié)果:(1)獲取的大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞貼壁生長,原代細胞呈圓形;36-48h開始有梭形細胞貼壁或者成團的細胞集落形成;7-8天左右,原來成團聚集的細胞向外擴散生長,細胞之間的間隙逐漸縮小并相互融合,呈現(xiàn)旋渦狀生長。約10天左右,瓶底細胞達到80%-90%融合。經(jīng)過消化傳代,細胞的純度逐漸增高。(2)誘導組細胞形狀變?yōu)閳A形并聚集成團,出現(xiàn)DTZ染色陽性細胞;在高糖環(huán)境作用下分泌胰島素且混合誘導組相比較于其余誘導組分泌量多;混合誘導組相關(guān)基因的表達量多于其余兩組。對照組未出現(xiàn)上述變化。結(jié)論:(1)膠原酶消化法能夠分離出大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞,通過胰蛋白酶消化法可以實現(xiàn)細胞的純化。(2)損傷胰腺提取液對大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞分化為胰島樣細胞具有促進作用,可以提高脂肪間充質(zhì)干細胞的轉(zhuǎn)化能力。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細胞 損傷胰腺提取液 胰島樣細胞 胰島素
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 第一部分 大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)6-18
• 引言6-7
• 1 材料和方法7-13
• 1.1 材料7
• 1.1.1 實驗動物7
• 1.1.2 主要試劑和設(shè)備7
• 1.2 實驗方法7-13
• 1.2.1 大鼠脂肪組織的獲取7-8
• 1.2.2 原代大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)8-10
• 1.2.3 細胞的傳代和培養(yǎng)液的更換10-11
• 1.2.4 細胞的儲存與復(fù)蘇11-13
• 2 結(jié)果13-16
• 2.1 細胞的形態(tài)學特點13-16
• 3 結(jié)論16-17
• 4 參考文獻17-18
• 第二部分 大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞誘導分化為胰島素分泌細胞18-33
• 引言18-19
• 1 材料和方法19-25
• 1.1 材料19-20
• 1.1.1 實驗動物19
• 1.1.2 主要試劑和設(shè)備19
• 1.1.3 實驗相關(guān)液體的配制19-20
• 1.2 大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的誘導分化20-24
• 1.2.1 大鼠糖尿病模型的制備20-21
• 1.2.2 損傷胰腺提取液的制備21
• 1.2.3 脂肪間充質(zhì)干細胞的誘導分化21
• 1.2.4 胰島素分泌細胞的鑒定21-24
• 1.3 統(tǒng)計學分析24-25
• 2 結(jié)果25-29
• 2.1 誘導后細胞的形態(tài)學特征25
• 2.2 DTZ染色25-26
• 2.3 葡萄糖刺激實驗26
• 2.4 免疫熒光染色26-28
• 2.5 RT-PCR檢測果28-29
• 3 討論29-30
• 4 結(jié)論30-31
• 5 參考文獻31-33
• 文獻綜述33-45
• 參考文獻39-45
• 攻讀碩士研究生期間的研究成果45-46
• 致謝46-47

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：提高大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)化為胰島樣細胞能力的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：353809