魚類及兩棲類動物的視網(wǎng)膜睫狀緣區(qū)（CMZ）存在視網(wǎng)膜干細胞，在視網(wǎng)膜損傷時，視網(wǎng)膜內(nèi)有增殖潛能的細胞可快速增殖、分化以修復(fù)更新受損細胞。近年來，隨著神經(jīng)干細胞研究的不斷深入，國外部分學(xué)者開始嘗試哺乳動物視網(wǎng)膜干細胞的分離探索工作。研究資料顯示，這些在進化上較高級的動物也存在著一個與魚類及兩棲類的CMZ區(qū)（睫狀緣區(qū)）相似的區(qū)域，國內(nèi)在視網(wǎng)膜干細胞的研究方面尚未見文獻報道。目的：研究視網(wǎng)膜干細胞的分離、體外培養(yǎng)方法與增殖、分化規(guī)律，以期為視網(wǎng)膜疾病的研究提供基礎(chǔ)性資料。方法：（1）應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)，在不同有絲分裂原（bFGF、EGF、胰島素）作用下，比較胎齡17天昆明小鼠眼的睫狀體部（CMZ）、視網(wǎng)膜色素部（RPE）、視網(wǎng)膜神經(jīng)部（NR）以及虹膜部體外培養(yǎng)細胞的特點，確定視網(wǎng)膜干細胞的存在部位；（2）通過免疫細胞化學(xué)及免疫熒光方法研究視網(wǎng)膜干細胞的增殖及分化特性；（3）體外應(yīng)用VEGF定向誘導(dǎo)視網(wǎng)膜干細胞向感光細胞分化。結(jié)果：（1）來自CMZ區(qū)的培養(yǎng)細胞，在特定外源性有絲分裂原作用下，可形成懸浮生長的細胞團，經(jīng)多次傳代，細胞增殖能力未見衰減。BrdU標(biāo)記結(jié)果顯示增殖的大部分細胞為BrdU陽... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

培養(yǎng)細胞的形態(tài)觀察^，分裂中的堪養(yǎng)細胞哎x20》8E培養(yǎng)中的瓜浮細胞Sx峋C}第8代的培界繃腳團你1劫

血清誘導(dǎo)分化后GFAp免疫反應(yīng)陽性細胞}c法)

6. VEGF 的定向誘導(dǎo)作用6.1 培養(yǎng)細胞的觀察6.1.1 VEGF 組 培養(yǎng) 12h 細胞貼壁，部分細胞有突起伸出。7d 后，多數(shù)細胞貼壁生長，分布均勻，折光性好，形態(tài)多樣，大部分細胞突起較短。可見少量懸浮細胞團，折光性較差，多為已凋亡的細胞。瓶底有較多死亡細胞及細胞碎片。6.1.2 非 VEGF 組 培養(yǎng) 2h 可見部分細胞貼壁。7d 后，細胞貼壁生長良好，分布較均勻。6.2 熒光顯微鏡下觀察6.2.1 實驗組 VEGF 作用組鏡下可見散落的呈明顯紅色熒光的抗 Opsin 陽性細胞，陽性細胞胞體明顯，突起不明顯(圖 9 A)。非 VEGF 組陽性細胞數(shù)量較少(圖 9 B)，多數(shù)視野細胞數(shù)為 0。6.2.2 空白對照組 未見陽性細胞。6.3 VEGF 組與非 VEGF 組誘導(dǎo)生成感光細胞的比較 見圖 9、表 2。


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