發(fā)布時(shí)間：2017-05-06 00:07

  本文關(guān)鍵詞：流感病毒感染下激活α7nAChR對(duì)IL-4誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2型極化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:巨噬細(xì)胞(MΦ)受到病原體及其LPS,IFN-γ等刺激,會(huì)產(chǎn)生M1型極化,參與炎癥反應(yīng);在細(xì)胞因子如IL-4、IL-13等作用下,會(huì)產(chǎn)生M2型極化,參與炎癥修復(fù)。迷走神經(jīng)釋放的乙酰膽堿可以通過α7 n ACh R減輕MΦ因LPS或細(xì)菌刺激引起炎癥反應(yīng),但不調(diào)控M2型極化。流感病毒感染下,激活α7 n ACh R是否影響MΦM2極化未見報(bào)道。目的:激活α7 n ACh R是否影響流感病毒感染IL-4誘導(dǎo)的MΦM2極化及其分子機(jī)制。方法:α7 n ACh R特異性激動(dòng)劑(GTS-21)預(yù)處理BMDM,然后感染流感病毒(PR8),6 h后接受IL-4刺激,24 h收取細(xì)胞,提取RNA和蛋白進(jìn)行Q-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn),檢測(cè)Arg 1的表達(dá)等。野生型、α7 n ACh R或Akt1敲除小鼠BMDM用來對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行證實(shí)。在體用PR8感染野生型和α7 n ACh R或Akt1敲除小鼠,感染后3、5天處死小鼠取BALF細(xì)胞和肺臟進(jìn)行Arg 1等分子測(cè)定。結(jié)果:激活MΦα7 n ACh R能增強(qiáng)IL-4誘導(dǎo)Arg 1(M2型極化的標(biāo)記分子)的表達(dá)但不影響參與M2型極化的轉(zhuǎn)錄因子水平,如p-STAT6。在野生型BMDM中,激活α7 n ACh R可以劑量依賴性地抑制Akt磷酸化。在α7 n ACh R敲除的BMDM中,激活α7 n ACh R不能促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)的Arg 1的表達(dá)。在Akt1敲除的BMDM中,激活α7 n ACh R促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)MΦ的M2型效率顯著降低。α7 n ACh R敲除小鼠感染流感病毒較野生型小鼠肺勻漿Arg 1表達(dá)顯著減少。Akt1敲除小鼠感染流感病毒后,肺勻漿和BALF細(xì)胞中的Arg 1表達(dá)也較野生型小鼠顯著升高。結(jié)論:流感病毒感染下激活α7 n ACh R促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)BMDM的M2型極化。Akt及其磷酸化在BMDM的M2型極化中起著不同作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓來源巨噬細(xì)胞 流感病毒 α7乙酰膽堿受體 膽堿能抗炎癥通路 巨噬細(xì)胞M2極化 精氨酸酶1 Akt
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 一、引言9-11
• 1.1 MΦ來源9
• 1.2 MΦ極化和作用9-10
• 1.3 流感病毒與MΦ10
• 1.4 膽堿能抗炎癥通路10-11
• 二、實(shí)驗(yàn)材料與方法11-23
• 2.1 主要儀器11
• 2.2 試劑列表11-12
• 2.3 流毒病毒擴(kuò)增及PFU測(cè)定12-14
• 2.3.1 病毒雞胚繁殖12-13
• 2.3.2 病毒滴度測(cè)定13-14
• 2.4 髓源MΦ誘導(dǎo)14-16
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)材料14
• 2.4.2 制備小鼠成纖維L929 細(xì)胞上清液14
• 2.4.3 小鼠骨髓細(xì)胞的分離和提取14-15
• 2.4.4 提取小鼠骨髓細(xì)胞時(shí)裂解紅細(xì)胞15
• 2.4.5 小鼠BMDM誘導(dǎo)培養(yǎng)15-16
• 2.4.6 小鼠BMDM形態(tài)16
• 2.5 小鼠BMDM純度分析16-17
• 2.6 GTS-21 刺激實(shí)驗(yàn)17-18
• 2.7 WESTERN BLOTTING18-19
• 2.8 抽提BMDM全RNA19
• 2.9 CDNA合成19-20
• 2.10 REAL-TIME PCR20-21
• 2.11 BMDM分泌TNF-Α 檢測(cè)步驟21-22
• 2.12 統(tǒng)計(jì)分析方法22
• 2.13 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理批準(zhǔn)22-23
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-36
• 3.1 體外誘導(dǎo)骨髓來源MΦ的陽性率23-24
• 3.2 PR8 感染下，激活 Α7 NACHR對(duì)BMDM極化標(biāo)志分子的影響24-25
• 3.3 BMDM感染PR8 條件下，，激活 Α7 NACHR對(duì)IL-4 誘導(dǎo)ARG1及其轉(zhuǎn)錄因子的影響25-26
• 3.4 感染PR8 條件下，激活 Α7 NACHR抑制BMDM分泌TNF-Α26-27
• 3.5 感染PR8 條件下，敲除 Α7 NACHR抑制IL-4 誘導(dǎo)BMDM的M2 極化27-28
• 3.6 敲除 Α7 NACHR對(duì)感染PR8 小鼠肺勻漿中ARG1的影響28-29
• 3.7 BMDM感染PR8 條件下，不同濃度的GTS-21 對(duì)IL-4 誘導(dǎo)ARG1的影響29-30
• 3.8 BMDM感染PR8 條件下，激活 Α7 NACHR對(duì)不同濃度IL-4 誘導(dǎo)ARG1的影響30-31
• 3.9 BMDM感染PR8 條件下，激活 Α7 NACHR抑制PR8 誘導(dǎo)的P-AKT31-32
• 3.10 敲除AKT1 對(duì)BMDM M2 極化的影響32-33
• 3.11 小鼠感染PR8 條件下，敲除AKT1 對(duì)其肺勻漿和BALF細(xì)胞ARG1的影響33-36
• 四、分析與討論36-39
• 五、參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 發(fā)表文章及個(gè)人簡歷49-50
• 縮略詞表50-52
• 致謝52-53

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