本文關(guān)鍵詞：不飽和脂肪酸代謝產(chǎn)物前列腺素（PG）對樹突狀細(xì)胞的調(diào)控以及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是機(jī)體生命活動所不可或缺的組分,它非但是細(xì)胞膜的重要組成成分,并且各類不飽和脂肪酸呈現(xiàn)出不同的作用,介導(dǎo)機(jī)體的促炎或抑炎反應(yīng)。然而對于其發(fā)生作用的分子機(jī)制還沒有被很好地闡明,本研究通過觀察其對免疫系統(tǒng)的重要參與者“樹突狀細(xì)胞”的調(diào)控作用的基礎(chǔ)上探索其可能的分子機(jī)制。方法：1.前列腺素E2及E3對骨髓多能造血干細(xì)胞分化成樹突狀細(xì)胞的調(diào)控。(1)將骨髓細(xì)胞從C57BL/6小鼠的股骨和頸骨中沖出,收集細(xì)胞破紅后計(jì)數(shù),得到骨髓細(xì)胞的單細(xì)胞懸液。(2)以6×105每孔將細(xì)胞種入24孔板中。實(shí)驗(yàn)分為3組,第一組在無血清培養(yǎng)基中加入10ng/ml GM-CSF和1ng/ml IL-4,第二和第三組在此基礎(chǔ)上分別添加50ng/ml PGE2或50ng／ml PGE3.每天半量換培養(yǎng)液,6天后將細(xì)胞吹起收集。(3)計(jì)數(shù)收集到的細(xì)胞,將細(xì)胞進(jìn)行瑞氏染色,在高、低倍鏡下拍攝細(xì)胞在分化過程中的形態(tài)變化。(4)流式檢測經(jīng)前列腺素誘導(dǎo)后CD11b+CD11c+樹突狀細(xì)胞的生成情況,以及Ly6G+CD11b+粒系MDSC細(xì)胞的比例,并計(jì)數(shù)其絕對數(shù),檢測前列腺素對于骨髓干細(xì)胞分化過程的調(diào)控。(5)Q-PC R檢測收集后混合細(xì)胞和分選CDllc+DC的IL-10、IL-12、IDO、Arg-1以及COX-2的mRNA水平表達(dá)情況。(6)由于PPARγ在脂代謝調(diào)控中占有非常重要的地位,故我們檢測了分別用50ng /ml PGE2和PGE3處理的骨髓干細(xì)胞0h、2h、6h、12h、24h時PPARγ的表達(dá)情況,探討其在前列腺素調(diào)控中所起的作用。2.前列腺素E2和E3對成熟DC的調(diào)控作用。(1)小鼠骨髓細(xì)胞在使用GM-CSF以及IL-4誘導(dǎo)7天后,輕輕吹起上層細(xì)胞,收集后計(jì)數(shù),將細(xì)胞以6×105/孔種入24孔板中,以不同種類和濃度前列腺素刺激24小時后,收集細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。(2)流式分析前列腺素處理后DC表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子的表達(dá)情況。(3)Q-PCR分析不同濃度前列腺素處理組中IL-10、IL-12mRNA水平的表達(dá)。(4)在之前實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以5Ong/ml前列腺素處理樹突狀細(xì)胞24h后,再以O(shè)VA全蛋白與樹突狀細(xì)胞孵育6小時,提呈抗原并活化C57BL/6與DO11.10(BALB/C背景)小鼠的F1代的CD4+T細(xì)胞(CD4+ T細(xì)胞事先經(jīng)過磁珠分選并用熒光示蹤染料CFSE標(biāo)記),細(xì)胞活化、增殖3天后,流式分析不同組CD4+T細(xì)胞的增殖情況。(5)培養(yǎng)7天后的成熟樹突狀細(xì)胞經(jīng)50ng/ml不同前列腺素處理過后,用OVA-Alexa488與其孵育2h,并且以4℃處理組為對照,流式檢測DC細(xì)胞吞噬能力的變化。結(jié)果：(1)在骨髓干細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞分化的過程中,如果添加前列腺素,無論是PGE2還是PGE3,都會使誘導(dǎo)后的細(xì)胞總數(shù)上升,并且瑞氏染色結(jié)果顯示粒系細(xì)胞增多。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比前列腺素處理組DC的比例下調(diào),粒系來源MDSC細(xì)胞比例上調(diào)；分泌的免疫抑制性細(xì)胞因子例如Arg-1、 IDO、IL-10等均上調(diào)。單獨(dú)分選出CDllc+樹突狀細(xì)胞后定量分析,發(fā)現(xiàn)前列腺素處理組DC的免疫抑制型因子與COX-2基因均上調(diào)。上述的作用均為PGE2強(qiáng)于PGE3。(2) Western Blotting分析不同前列腺素處理組,不同時間段的PPARγ蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)經(jīng)前列腺素處理后的細(xì)胞2h后P PARy表達(dá)上調(diào)。說明前列腺素調(diào)控分化過程的作用中,PPARγ可能起了一些作用。(3)對于成熟的DC來說,較低濃度的PGE2 (50ng/ml)調(diào)控DC表達(dá)更高的CD80、 CD86和MHC-Ⅱ分子,而隨著濃度的上升,這些分子的表達(dá)受到了抑制。與流式結(jié)果相一致,Q-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),在低濃度PGE2時,DC細(xì)胞的炎性因子IL-12表達(dá)上升而抑炎因子IL-10表達(dá)相對較低。綜上所述,低濃度的PGE2可以使樹突狀細(xì)胞上調(diào)炎癥狀態(tài),而高濃度時正好相反。(4)橫向?qū)Ρ?0ng/ml時PGE2和PGE3對樹突狀細(xì)胞的調(diào)控功能,發(fā)現(xiàn)在這一濃度下,無論是從表型還是從細(xì)胞因子分泌上,PGE2-DC的促炎效應(yīng)顯著強(qiáng)于PGE3-DC對比不同前列腺素對DC提呈以及吞噬功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)提呈能力PGE2-DC要強(qiáng)于,相反,其吞噬能力弱于PGE3-DC結(jié)論：在誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞向DC分化的過程中,如果加入PGE2和PGE3后,DC的比PGE3-DC。例顯著減少,粒系來源的細(xì)胞比例明顯增高,而且,細(xì)胞呈現(xiàn)免疫抑制的狀態(tài),MDSC并且這一效應(yīng)可能與以及PPARy-2上調(diào)有關(guān)。低濃度的前列腺素可以調(diào)控成熟樹COX突狀細(xì)胞上調(diào)共刺激分子,以及促炎細(xì)胞因子的表達(dá),而在較高濃度的時候則出現(xiàn)抑制。對比相同濃度前列腺素處理的(50ng/ml)口PGE2-DC結(jié)果發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)PGE3-DC,胞在經(jīng)過PGE2處理過后,的抗原提呈能力要強(qiáng)于PGE3處理組,相反吞噬能PGE2-DC力則是強(qiáng)PGE3-DC于PGE2-DC。
【關(guān)鍵詞】：不飽和脂肪酸 前列腺素E2 前列腺素E3 骨髓來源的免疫抑制細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞 過氧化物酶體增殖物激活受體γ
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-16
• 第一章 緒論16-27
• 1.1 前列腺素(PROSTAGLANDIN)16-20
• 1.1.1 前列腺素簡介16-17
• 1.1.2 前列腺素的生物學(xué)效應(yīng)17-18
• 1.1.3 PGE_2的受體18-19
• 1.1.4 COX酶與PPARγ19
• 1.1.5 PGE_2和PGE_3對樹突狀細(xì)胞調(diào)控的研究現(xiàn)狀19-20
• 1.2 樹突狀細(xì)胞20-22
• 1.2.1 樹突狀細(xì)胞的分類20-21
• 1.2.2 樹突狀細(xì)胞的功能21
• 1.2.3 樹突狀細(xì)胞的表面分子21
• 1.2.4 樹突狀細(xì)胞與臨床應(yīng)用21-22
• 1.3 MDSC細(xì)胞22-24
• 1.3.1 MDSC的起源22
• 1.3.2 MDSC的表面標(biāo)志22
• 1.3.3 MDSC的作用及其機(jī)制22-23
• 1.3.4 PGE_2與MDSC23-24
• 1.4 本研究的目的、方案設(shè)計(jì)、及其意義24-27
• 1.4.1 研究目的24
• 1.4.2 研究方法24
• 1.4.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)24-25
• 1.4.4 研究意義25-27
• 第二章 前列腺素對骨髓多能造血干細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞分化的調(diào)控27-48
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與試劑27-28
• 2.1.2 主要溶液的配制28
• 2.1.3 儀器與耗材28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-35
• 2.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞的制備及樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)29-30
• 2.2.2 瑞氏染色步驟30
• 2.2.3 細(xì)胞表面分子的標(biāo)記30-31
• 2.2.4 Western Blotting31
• 2.2.5 RNA的提取以及定量PCR步驟31-33
• 2.2.6 樹突狀細(xì)胞分選33
• 2.2.7 CD4~+T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(體外)33-34
• 2.2.8 樹突狀細(xì)胞的吞噬功能實(shí)驗(yàn)(體外)34-35
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-46
• 2.3.1 前列腺素處理細(xì)胞量的變化35-36
• 2.3.2 前列腺素處理組粒系細(xì)胞變化36-37
• 2.3.3 前列腺素處理組粒系MDSC細(xì)胞比例改變37-38
• 2.3.4 前列腺素處理組免疫抑制性細(xì)胞因子分泌量38
• 2.3.5 前列腺素對分化后樹突狀細(xì)胞免疫抑制型因子分泌的調(diào)控38-39
• 2.3.6 前列腺素對分化后的樹突狀細(xì)胞COX-2表達(dá)的調(diào)控39-40
• 2.3.7 前列腺素處理后細(xì)胞PPARγ的表達(dá)40
• 2.3.8 前列腺素處理組樹突狀細(xì)胞比例的變化40-42
• 2.3.9 不同前列腺素對成熟的樹突狀細(xì)胞的表型調(diào)控42-43
• 2.3.10 不同的前列腺素對成熟樹突狀細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響43-44
• 2.3.11 不同前列腺素對成熟樹突狀細(xì)胞刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的調(diào)控44-45
• 2.3.12 不同前列腺素對成熟的樹突狀細(xì)胞吞噬抗原能力的影響45-46
• 2.4 討論46-48
• 第三章 結(jié)論與展望48-49
• 3.1 主要的結(jié)論48
• 3.2 展望48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 綜述：樹突狀細(xì)胞疫苗治療腫瘤的研究進(jìn)展57-63
• 綜述參考文獻(xiàn)61-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章及專利64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王一;黎燕;;髓樣來源抑制性細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國腫瘤生物治療雜志;2011年04期

  本文關(guān)鍵詞：不飽和脂肪酸代謝產(chǎn)物前列腺素（PG）對樹突狀細(xì)胞的調(diào)控以及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345312