本文關(guān)鍵詞：PTEN磷酸化修飾在HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞增殖中的作用及其調(diào)控機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討PTEN的磷酸化修飾是否參與HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞增殖及其磷酸化修飾的調(diào)控機(jī)制。方法:1以小鼠系膜細(xì)胞(mouse mesangial cell,MMC)為研究對象,100μg.L~(-1)HMGB1為刺激物,分別于刺激0 h、12 h和24 h收集細(xì)胞,Western blot技術(shù)檢測PCNA蛋白表達(dá)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測Brd U陽性細(xì)胞百分率。2以100μg.L~(-1)HMGB1刺激MMC,分別于刺激0 min、10 min、30 min、60 min和120 min時收集細(xì)胞,Western blot技術(shù)檢測p-PTEN-Ser380、p-PTEN-Ser370、p-S6K-Thr389、S6K蛋白表達(dá)。3將常規(guī)培養(yǎng)的MMC隨機(jī)分為對照組(control group)、HMGB1刺激組(HMGB1 group)、HMGB1+空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(H+EV)、HMGB1+PTEN非磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(H+S380A)和HMGB1+PTEN持續(xù)磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(H+S380D),以Brd U摻入結(jié)合免疫熒光技術(shù)檢測Brd U表達(dá);免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測Ki67蛋白的表達(dá)。4將常規(guī)培養(yǎng)的MMC隨機(jī)分為control group、HMGB1 group和HMGB1+PF-4708671 group,先加入25μmol.L~(-1)的PF-4708671預(yù)處理24 h,再更換為含100μg.L~(-1)HMGB1的培養(yǎng)基,繼續(xù)孵育10min、30min和24 h,Western blot技術(shù)檢測p-PTEN-Ser380、p-S6K-Thr389、S6K和PCNA蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1 HMGB1能夠上調(diào)小鼠系膜細(xì)胞的增殖水平1.1流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:與HMGB1刺激0 h組相比,HMGB1刺激12 h組Brd U陽性細(xì)胞百分率有所升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義;而HMGB1刺激24 h時,其陽性細(xì)胞百分率明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.2 Western blot結(jié)果顯示:與HMGB1刺激0 h組相比,HMGB1刺激12h組與HMGB1刺激24 h組PCNA蛋白表達(dá)明顯升高,并且HMGB1刺激24 h時PCNA蛋白表達(dá)高于HMGB1刺激12 h時,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2 HMGB1誘導(dǎo)小鼠系膜細(xì)胞中PTEN(Ser380)發(fā)生磷酸化修飾(p-PTEN-Ser380)Western blot結(jié)果顯示:HMGB1刺激10 min時p-PTEN-Ser380水平升高,30 min達(dá)高峰,與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);隨后降低,120 min時回落至正常水平;而HMGB1刺激各時間點,PTEN(Ser370)的磷酸化水平(p-PTEN-Ser370)均無明顯變化。3 PTEN(Ser380)的磷酸化參與HMGB1誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖Brd U摻入法細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果顯示:與對照組相比,HMGB1刺激組Brd U陽性細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與HMGB1刺激組相比,HMGB1+空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Brd U陽性細(xì)胞百分率無明顯變化,HMGB1+PTEN非磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Brd U陽性細(xì)胞百分率明顯下降,HMGB1+PTEN持續(xù)磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Brd U陽性細(xì)胞百分率明顯升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示:Ki67陽性信號主要定位于細(xì)胞核,與對照組相比,HMGB1刺激組Ki67陽性細(xì)胞百分率明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與HMGB1刺激組相比,HMGB1+空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Ki67陽性細(xì)胞百分率無明顯變化,HMGB1+PTEN非磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Ki67陽性細(xì)胞百分率明顯下降,而HMGB1+PTEN持續(xù)磷酸化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Ki67陽性細(xì)胞百分率明顯上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 HMGB1促進(jìn)小鼠系膜細(xì)胞中S6K(Thr389)發(fā)生磷酸化Western blot結(jié)果顯示:與HMGB1刺激0 min組相比,HMGB1刺激10 min后S6K(Thr389)磷酸化水平(p-S6K-Thr389)升高,30 min時有所回落,但仍高于正常對照組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),60 min和120 min接近正常水平;HMGB1刺激各時間點,總S6K表達(dá)無明顯變化。5 PF-4708671能夠抑制HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞中p-PTEN-Ser380、PCNA、p-S6K-Thr389蛋白的表達(dá)Western blot結(jié)果顯示:與對照組相比,HMGB1刺激組中p-PTEN-Ser380、p-S6K-Thr389和PCNA蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào);而與HMGB1刺激組相比,HMGB1+PF-4708671組p-PTEN-Ser380、p-S6K-Thr389和PCNA蛋白表達(dá)水平明顯下降,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 HMGB1能夠促進(jìn)小鼠系膜細(xì)胞中PTEN(Ser380)發(fā)生磷酸化修飾;2 PTEN(Ser380)磷酸化修飾參與了HMGB1誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖;3 HMGB1介導(dǎo)的PTEN(Ser380)磷酸化修飾是通過S6K磷酸化實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白1 與張力蛋白同源第10染色體丟失的磷酸酶 磷酸化 核蛋白體S6激酶 Ki67 增殖細(xì)胞核抗原 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-35
• 附表35-39
• 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 綜述 PTEN與相關(guān)疾病的研究進(jìn)展49-72
• 參考文獻(xiàn)61-72
• 致謝72-73
• 個人簡歷73-74

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：343038