本文關(guān)鍵詞：TAT-Ag85B蛋白疫苗的優(yōu)化及其免疫效應(yīng)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 為獲得大量目的蛋白,對pET28a-TAT-Ag85B質(zhì)粒在E.coli BL21(DE3)中表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,并通過體內(nèi)外實驗觀察表達(dá)蛋白的免疫作用,為結(jié)核病等疾病的防控提供依據(jù)。方法 1.將質(zhì)粒pET28a-TAT-Ag85B轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,使用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)TAT-Ag85B融合蛋白表達(dá),聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PACGE)對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定分析。2.分別從誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo)時間三個方面對蛋白表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。3.使用His-tag離子親和層析柱分離純化融合蛋白,經(jīng)SDS-PAGE電泳分析蛋白表達(dá)情況,并使用Western blot鑒定。3.分3次皮下注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫2周后,ELISA法檢測血清中抗Ag85B滴度,并分別取小鼠脾細(xì)胞與巨噬細(xì)胞,共培養(yǎng)后ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子的濃度。結(jié)果 1.經(jīng)酶切鑒定質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功,并且通過SDS-PAGE鑒定誘導(dǎo)后獲得的蛋白為所需目的蛋白。2.通過對照試驗得出使用lmmol/L IPTG在28℃條件下誘導(dǎo)8h是目的蛋白的最佳表達(dá)條件,并且獲得了高表達(dá)的目的蛋白。3.經(jīng)Vestern blot鑒定,獲得的目的蛋白是所需蛋白TAT-Ag85B。4.ELISA法檢測免疫小鼠血清中抗Ag85B抗體變化情況,發(fā)現(xiàn)TAT-Ag85B組IgG滴度顯著增高。檢測培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子IL-2的分泌情況,借此反應(yīng)巨噬細(xì)胞抗原提呈能力,發(fā)現(xiàn)經(jīng)TAT-Ag85B蛋白刺激的細(xì)胞抗原提呈能力增強(qiáng)。結(jié)論本實驗對TAT-Ag85B融合蛋白的表達(dá)條件進(jìn)行了一系列優(yōu)化,獲得了大量高純度目的蛋白。為下一步體內(nèi)外實驗提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。并且通過動物實驗發(fā)現(xiàn)TAT-Ag85B融合蛋白具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞(M(?))抗原提呈能力的作用。因此,該蛋白對如結(jié)核病等免疫性疾病的防治有一定的療效,這為進(jìn)一步研究其在抗結(jié)核以及其他免疫性疾病藥物提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 TAT-Ag85B 蛋白疫苗 優(yōu)化 免疫效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392-3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 插圖或附表清單11-12
• 注釋說明清單12-14
• 引言14-16
• 第一部分 TAT-Ag85B融合蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化16-33
• 1.1 材料16-20
• 1.2 方法20-27
• 1.3 結(jié)果27-32
• 1.4 討論32-33
• 第二部分 TAT-Ag85B DNA疫苗的免疫效應(yīng)33-40
• 2.1 材料33-34
• 2.2 方法34-37
• 2.3 結(jié)果37-38
• 2.4 討論38-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 附錄A pET-28a(+)質(zhì)粒圖譜45-46
• 附錄B pET28a-TAT-Ag85B測序圖46-48
• 后記或致謝48-49
• 作者簡介及讀研期間獲獎情況49
• 在讀期間參與撰寫的文章49-50
• 在讀期間參與的主要項目50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李武;鄧光存;劉曉明;王玉炯;;結(jié)核分枝桿菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];生物工程學(xué)報;2014年02期

  本文關(guān)鍵詞：TAT-Ag85B蛋白疫苗的優(yōu)化及其免疫效應(yīng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：342715