發(fā)布時(shí)間：2017-05-02 22:03

  本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌融合蛋白PsaA-PcpA疫苗的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在全世界范圍內(nèi)特別是發(fā)展中國(guó)家,肺炎是引起兒童和老人高發(fā)病率和死亡率的疾病。根據(jù)WHO報(bào)道,每年約有160萬人感染肺炎致死,其中70萬至100萬病例是兒童。肺炎鏈球菌是導(dǎo)致肺炎的主要病原體,同時(shí)它還能引發(fā)鼻竇炎、中耳炎、腦膜炎和菌血癥等疾病。由于抗生濫用導(dǎo)致耐藥菌株的出現(xiàn),疫苗已成為防止肺炎鏈球菌感染的主要方式。目前,臨床上被廣泛使用肺炎疫苗均以多糖莢膜為疫苗組分,雖然臨床效果明顯,但其保護(hù)范圍受限于血清型,同時(shí)因?yàn)榻M分復(fù)雜生產(chǎn)成本高,導(dǎo)致價(jià)格超過了第三世界國(guó)家的承受能力。由肺炎鏈球菌蛋白作為疫苗免疫原的疫苗策略有助于擺脫血清型的束縛,同時(shí)預(yù)期的生產(chǎn)成本也會(huì)降低,并且在機(jī)理上具有更好的免疫源性,因此成為了近幾年肺炎鏈球菌疫苗的研發(fā)方向。多種肺炎鏈球菌蛋白聯(lián)合使用作為疫苗組分被認(rèn)為可以提升疫苗的效果。肺炎鏈球菌表面粘附素A暴露于肺炎鏈球菌表面,序列保守,免疫原性較好,研究表明抗Psa A抗體具有減少肺炎鏈球菌定殖的作用。肺炎鏈球菌膽堿結(jié)合蛋白A是一種序列保守的表面蛋白,已有研究推測(cè)Pcp A可能在肺炎鏈球菌的黏附過程中發(fā)揮作用而在定殖中并非必須。本文同時(shí)采用這兩種蛋白作為免疫原,將Psa A的全長(zhǎng)序列,Pcp A的N端功能區(qū)序列融合,構(gòu)建為融合蛋白Psa A-Pcp A,小鼠免疫Psa A-Pcp A后,檢測(cè)特異性抗體水平,同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行肺炎鏈球菌的攻毒。結(jié)果表明,Psa A-Pcp A融合蛋白免疫原性較好,能夠有效地刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答,血清抗體水平在105以上,在肺炎鏈球菌的攻毒實(shí)驗(yàn)中,能對(duì)小鼠產(chǎn)生很好的保護(hù)能力,保護(hù)效果稍好于市售23-價(jià)多糖疫苗。以上結(jié)果證明Psa A-Pcp A作為廣譜肺炎蛋白疫苗的候選組分具有可行性。
【關(guān)鍵詞】：肺炎鏈球菌黏附素 肺炎鏈球菌膽堿結(jié)合蛋白 融合蛋白 廣譜肺炎鏈球菌蛋白疫苗
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-17
• 第一節(jié) 肺炎及肺炎鏈球菌10-11
• 第二節(jié) 肺炎鏈球菌疫苗簡(jiǎn)史與現(xiàn)狀11-13
• 第三節(jié) PsaA蛋白簡(jiǎn)介13-14
• 第四節(jié) PcpA蛋白簡(jiǎn)介14-15
• 第五節(jié) 論文設(shè)計(jì)15-17
• 第二章 PsaA-PcpA融合蛋白的制備17-33
• 第一節(jié) 材料與儀器17-20
• 1. 質(zhì)粒與菌株17
• 2. 限制性內(nèi)切酶及試劑盒17
• 3. 主要試劑17-18
• 4. 主要儀器18
• 5. 主要溶液的配制18-20
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法20-26
• 1. 目的基因與引物設(shè)計(jì)20-21
• 2. PCR21
• 3. 瓊脂糖凝膠回收目的基因片段21-22
• 4. 目的基因連接至質(zhì)粒載體22
• 5. 轉(zhuǎn)化入原核菌株22-23
• 6. 堿裂解法小提質(zhì)粒23-24
• 7. 限制性內(nèi)切酶進(jìn)行質(zhì)粒的酶切24
• 8. 融合蛋白PsaA-PcpA的表達(dá)24-25
• 9. SDS-PAGE25
• 10. Western Blot25
• 11. 鎳離子親和層析純化融合蛋白25-26
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 1. Overlap PCR制備PsaA-PcpA基因片段26-27
• 2. pET20b-PsaA-PcpA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建27-29
• 3. PsaA-PcpA融合蛋白的表達(dá)29-31
• 4. PsaA-PcpA融合蛋白的純化31-32
• 第四節(jié) 小結(jié)32-33
• 第三章 PsaA-PcpA融合蛋白的保護(hù)性研究33-38
• 第一節(jié) 材料與動(dòng)物33
• 1. 蛋白、菌株與動(dòng)物33
• 2. 主要試劑33
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 1. PsaA-PcpA融合蛋白免疫原性檢測(cè)33-34
• 2. PsaA-PcpA攻毒保護(hù)性實(shí)驗(yàn)34-35
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-37
• 1. PsaA-PcpA融合蛋白免疫原性測(cè)定35-36
• 2. PsaA-PcpA融合蛋白攻毒保護(hù)性實(shí)驗(yàn)36-37
• 第四節(jié) 小結(jié)37-38
• 本文結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 致謝42

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