發(fā)布時間：2021-10-07 09:02

　　乙型肝炎病毒（HBV）感染是急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要原因。全世界約有3.5億人感染乙型肝炎病毒,其中約25-40%的病人最終死于該病的并發(fā)癥。目前尚無特效藥物,因此,開發(fā)新型、廉價、高效、副作用小、穩(wěn)定且有靶向性的基因治療藥物已成為治療該病的重要途徑。脫氧核酶（DNAzyme）是一種具有酶活性的DNA分子。它的結構極似錘頭樣核酶,含有一保守的催化區(qū)和兩個可變的側翼結合區(qū)。它可以特異性地與靶RNA配對,切割靶RNA而使其失去生物學活性。鎖核酸核酶（LNAzyme）是DNAzyme的一種衍生物,是在DNAzyme的兩個結合臂上引入一個或幾個LNA單體而形成的。通過LNA單體的引入,使其對RNA的切割能力明顯提高,且特異性強。HBV復制過程中包括一個逆轉(zhuǎn)錄過程,針對HBV前基因組RNA的特定區(qū)域設計合成HBV特異性的脫氧核酶及鎖核酸核酶,可以阻斷HBV的復制和表達。本實驗針對HBV設計合成了未修飾的10-23DNAzyme、點硫代修飾的10-23DNAzyme及LNAzyme。用其轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細胞,觀察它們對HepG2.2.15細胞HBsAg、HBeAg表達的抑制作... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

LNA和DNA的結構

四、LNAzyme 的結構與切割效率LNAzyme 是在 DNAzyme 的兩個結合臂上引入一個或幾個 LNA 類單體而形成的，在 10-23DNAzyme 的每個結合臂上引入幾個 LNA 想呢？Vester 等[30]研究了引入 LNA 單體的最適宜個數(shù)，使得 LNAz接近底物 RNA 結構中特異性靶位點，使容易切割，又有利于釋放，使 LNAzyme 能夠自由地在另一個底物分子上發(fā)動新一個循環(huán)的。研究表明，每引入一個 LNA 單體，就顯著增加了它們的結合親和鏈溫度（Tm）提高，在 18 聚體的寡核苷酸中每引入一個 LNA 單 增加 1.5-4℃，故引入 LNA 單體可顯著提高 LNAzyme 與靶序列有效力[26]。但是，LNA 單體顯著提高了 LNAzyme 與 RNA 形成雙螺旋度[5-7]。因此，過多的 LNA 在 DNAzyme 的結合臂將很可能降低 RN的解離率[30]。實驗結果表明，在每個結合臂上引入 2-3 個 LNA 圖 1-2 DNAzyme 與 LNAzyme 二級結構

0-23DNAzymeNAzyme（10-23DNA 酶或脫氧核酶）的命名是源于它的第 10 輪循環(huán)的第 23 個克隆[50]。該酶具有許多優(yōu)點如切割序列要求十分簡單；催化切割效率極高，超過過某些蛋白質(zhì)酶；更令人興奮的是，當 Mg2+濃度降至高的活性；該酶其催化活性區(qū)高度保守[53-56]。23DNAzyme 的結構及靶位特征：它的結構極似錘頭樣守的催化區(qū)和 2 個可變的側翼結合區(qū)。其催化區(qū)序列，為 5’-GGCTAGCTACAACGA-3’，其序列高度保守合區(qū)，即底物識別區(qū)，一般兩個側翼長約 7-9 個核ck 堿基配對原則與靶 RNA 特異性結合。10-23DNAzy交匯點，即 5’-R↓Y-3’（R=A 或 G，Y=U 或 C，↓的磷酸二酯鍵），其中 R 不形成堿基配對，Y 則必須圖 1-3 8-17DNAzyme 和 10-23DNAzyme 結構圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]脫氧核酶在轉(zhuǎn)基因肝癌細胞中對HCV5′-非編碼區(qū)的抑制活性[J]. 于樂成,王升啟,顧長海,陳忠斌,毛青,劉鴻凌.  中華傳染病雜志. 2004(02)
[2]10-23DNA酶體外切割HBV前C/C區(qū)mRNA的初步研究[J]. 鄭錦輝,王峰,�？∑�.  臨床肝膽病雜志. 2002(06)
[3]錘頭狀核酶在HepG2.2.15細胞內(nèi)的抗HBV特性[J]. 馮英,孔玉英,汪垣,祁國榮.  生物化學與生物物理學報. 2002(02)



本文編號：3421749