目的:研究干擾素調(diào)節(jié)宿主限制性因子SAMHD1的表達(dá)而抑制HBV復(fù)制的分子機(jī)制。方法:首先不同劑量的干擾素α、β和γ處理Huh7. 0細(xì)胞,通過(guò)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)SAMHD1在轉(zhuǎn)錄和翻譯后的表達(dá)水平;進(jìn)一步通過(guò)siRNA干擾內(nèi)源性的SAMHD1,再評(píng)價(jià)干擾素α、β對(duì)病毒的抑制效應(yīng);最后通過(guò)免疫熒光檢測(cè)了干擾素α誘導(dǎo)內(nèi)源性SAMHD1的細(xì)胞定位及Southern blot檢測(cè)了SAMHD1細(xì)胞定位對(duì)病毒復(fù)制的影響。結(jié)果:在Huh7. 0細(xì)胞中,SAMHD1的RNA水平和蛋白表達(dá)明顯受干擾素α和β的誘導(dǎo)升高;干擾SAMHD1后干擾素α和β對(duì)HBV復(fù)制的抑制作用消失; SAMHD1定位在細(xì)胞核內(nèi),干擾素α誘導(dǎo)SAMHD1同樣定位在細(xì)胞核內(nèi),缺失核定位信號(hào)后SAMHD1喪失了其抑制病毒復(fù)制的作用。結(jié)論:在Huh7細(xì)胞中,干擾素α、β能誘導(dǎo)SAMHD1表達(dá)上調(diào)來(lái)抑制HBV的復(fù)制,SAMDH1的抗病毒作用依賴于其細(xì)胞定位。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物工程雜志. 2019,39(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建和細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 免疫熒光檢測(cè)SAMHD1在細(xì)胞中的定位
        1.2.3 熒光定量PCR檢測(cè)干擾素處理后SAMHD1的表達(dá)
        1.2.4 Western blot檢測(cè)不同處理后的SAMHD1的表達(dá)
        1.2.5 病毒核心顆粒DNA的提取
        1.2.6 Southern Blot檢測(cè)HBV的復(fù)制水平
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 干擾素處理后SAMHD1的表達(dá)
    2.2 沉默SAMHD1后拮抗干擾素α、β對(duì)HBV的抑制作用
    2.3 SAMHD1抑制HBV依賴于其細(xì)胞定位
3 討論



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