發(fā)布時間：2021-09-22 11:43

　　目的:比較并優(yōu)化流式細胞術(shù)檢測人NK細胞體外細胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM釋放法或CFSE/7-AAD法分別對靶細胞進行標記,按10∶1和20∶1效靶比與7例NK細胞在37℃5%CO2培養(yǎng)箱共培養(yǎng)4 h,流式細胞術(shù)測定兩種不同標記方法的靶細胞死亡率。結(jié)果:各實驗組中CFSE/7-AAD法檢出的靶細胞死亡率均高于Calcein-AM釋放法,在低效靶比、弱細胞毒作用條件下,差異具有統(tǒng)計學意義。細胞毒作用較弱時,Calcein-AM釋放法平均熒強度變化不顯著、結(jié)果誤差較大;而CFSE/7-AAD法則能更加敏感地檢出靶細胞的死亡率。結(jié)論:CFSE/7-AAD法能夠特異、靈敏地檢出NK細胞的細胞毒活性,所獲得的結(jié)果更為可靠。 

【文章來源】：中國免疫學雜志. 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

靶細胞經(jīng)Calcein-AM或CFSE標記前后FL-1通道上熒光強度變化及NK細胞自發(fā)熒光Fig．1Fluorescenceintensityoftargetcellspriortoand

圖2Calcein-AM法釋放法檢測NK細胞對K562細胞和白血病原始細胞的細胞毒作用Fig．2CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCalcein-AMreleaseNote:A.MFIofK562cellsautofluorescence;B.MFIofK562cellsafterCalcein-AMlabeling;C.NK-K562cellsafterco-culture;D.MFIofK562cellsafterco-culture;E.MFIofleukemiablastautofluorescence;F.MFIofleukemiablastafterCalcein-AMlabeling;G.NK-leukemiablastafterco-culture;H.MFIofleukemiablastafterco-culture.圖3CFSE/7-AAD法檢測NK細胞對K562細胞和白血病原始細胞的細胞毒作用Fig．3CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCFSE/7-AADNote:A.NK-K562cellsafterco-culture;B.K562cellsweregatedinP2(CFSE+cells);C.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinK562targetcells(Q11-UＲ);D.NK-leukemiablastafterco-culture;E.leukemiablastweregatedinP2(CFSE+cells);F.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinleukemiablast(Q2-UＲ).3討論本文中，隨機健康獻血者外周血PBMC中NK細胞含量僅有(11.76±3.55)%。其他針對不同地區(qū)中國人群外周血NK細胞含量的研究表明，隨機人群外周血PBMC中NK細胞含量僅有(7.35～·823·中國免疫學雜志2019年第35卷

圖2Calcein-AM法釋放法檢測NK細胞對K562細胞和白血病原始細胞的細胞毒作用Fig．2CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCalcein-AMreleaseNote:A.MFIofK562cellsautofluorescence;B.MFIofK562cellsafterCalcein-AMlabeling;C.NK-K562cellsafterco-culture;D.MFIofK562cellsafterco-culture;E.MFIofleukemiablastautofluorescence;F.MFIofleukemiablastafterCalcein-AMlabeling;G.NK-leukemiablastafterco-culture;H.MFIofleukemiablastafterco-culture.圖3CFSE/7-AAD法檢測NK細胞對K562細胞和白血病原始細胞的細胞毒作用Fig．3CytotoxicityofNKcellsagainstK562cellsorleukemiablastdetectedbyCFSE/7-AADNote:A.NK-K562cellsafterco-culture;B.K562cellsweregatedinP2(CFSE+cells);C.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinK562targetcells(Q11-UＲ);D.NK-leukemiablastafterco-culture;E.leukemiablastweregatedinP2(CFSE+cells);F.percentageofCFSE+7-AAD+cellsinleukemiablast(Q2-UＲ).3討論本文中，隨機健康獻血者外周血PBMC中NK細胞含量僅有(11.76±3.55)%。其他針對不同地區(qū)中國人群外周血NK細胞含量的研究表明，隨機人群外周血PBMC中NK細胞含量僅有(7.35～·823·中國免疫學雜志2019年第35卷

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]一種經(jīng)濟高效的人外周血NK細胞純化方法的建立[J]. 王新利,李卿,高婷,姜又紅.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2010(03)
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本文編號：3403704