背景:β地中海貧血（簡稱β地貧）是一種具有高度異質性的遺傳疾病。由于β珠蛋白基因突變,造成α珠蛋白肽鏈和β珠蛋白肽鏈間的合成失平衡是其主要發(fā)病機制。在東南亞,包括我國西南、華南地區(qū),β地貧已成為嚴重的公共衛(wèi)生問題,其中β^41/42突變是最常見的導致重型β地貧的突變之一。 目的:克隆人地中海貧血基因β^41/42及調控系列LCR,構建該致病基因的體外真核表達體系,為該病基因治療的研究提供理想模型。 方法:抽提β^41/42純合子患者的DNA,PCR擴增出人β珠蛋白基因座控制區(qū)（LCR）和β^41/42基因,將其串連克隆至真核穩(wěn)定表達質粒pcDNA3.1（-）中,脂質體轉染至小鼠紅白血病細胞（MEL）,DMSO誘導MEL細胞表達,逆轉錄PCR檢測人β^41/42基因在MEL中的表達。 結果:成功構建了包括長為2.1kb的人β^41/42突變基因和長5.5kb的人β珠蛋白基因的遠端調控序列（LCR）的真核表達質粒pcDNA3.1-LCR-β^41... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人地中海貧血p‘/42l突變基因和LCR基因CPR擴增圖

而后者沒有。poDNA3.1一LCR，poDNA3.1G)經(jīng)LCR特異性引物PCR擴增，前者得到5.skb的帶，而后者沒有，說明LCR插入方向大小正確(見圖6)。

I、Ec0RI依次酶切分別產(chǎn)生2種和3種長度片段，分別為llKb、2.IKb和6Kb、5.SKb及1.6Kb，peoNA3.l一LCR一p‘，“，，peoNA3.1。)經(jīng)p‘，“，特異性引物PCR擴增，前者得到2.Ikb的帶，而后者沒有(見圖7、圖8)，說明LCR和p‘/42l基因插入方向大小正確。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3403229