背景:β地中海貧血（簡(jiǎn)稱β地貧）是一種具有高度異質(zhì)性的遺傳疾病。由于β珠蛋白基因突變,造成α珠蛋白肽鏈和β珠蛋白肽鏈間的合成失平衡是其主要發(fā)病機(jī)制。在東南亞,包括我國(guó)西南、華南地區(qū),β地貧已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題,其中β^41/42突變是最常見的導(dǎo)致重型β地貧的突變之一。 目的:克隆人地中海貧血基因β^41/42及調(diào)控系列LCR,構(gòu)建該致病基因的體外真核表達(dá)體系,為該病基因治療的研究提供理想模型。 方法:抽提β^41/42純合子患者的DNA,PCR擴(kuò)增出人β珠蛋白基因座控制區(qū)（LCR）和β^41/42基因,將其串連克隆至真核穩(wěn)定表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1（-）中,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至小鼠紅白血病細(xì)胞（MEL）,DMSO誘導(dǎo)MEL細(xì)胞表達(dá),逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)人β^41/42基因在MEL中的表達(dá)。 結(jié)果:成功構(gòu)建了包括長(zhǎng)為2.1kb的人β^41/42突變基因和長(zhǎng)5.5kb的人β珠蛋白基因的遠(yuǎn)端調(diào)控序列（LCR）的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-LCR-β^41... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人地中海貧血p‘/42l突變基因和LCR基因CPR擴(kuò)增圖

而后者沒有。poDNA3.1一LCR，poDNA3.1G)經(jīng)LCR特異性引物PCR擴(kuò)增，前者得到5.skb的帶，而后者沒有，說(shuō)明LCR插入方向大小正確(見圖6)。

I、Ec0RI依次酶切分別產(chǎn)生2種和3種長(zhǎng)度片段，分別為llKb、2.IKb和6Kb、5.SKb及1.6Kb，peoNA3.l一LCR一p‘，“，，peoNA3.1。)經(jīng)p‘，“，特異性引物PCR擴(kuò)增，前者得到2.Ikb的帶，而后者沒有(見圖7、圖8)，說(shuō)明LCR和p‘/42l基因插入方向大小正確。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因座控制區(qū)元件HS2、HS3對(duì)β-珠蛋白基因表達(dá)的調(diào)控[J]. 賈春平,黃淑幀,曾溢滔.  遺傳學(xué)報(bào). 2002(07)
[2]廣東地區(qū)β地中海貧血復(fù)合缺失型α地中海貧血雙重雜合子檢出率[J]. 韓俊英,曾瑞萍,胡彬.  中華血液學(xué)雜志. 2001(10)
[3]反轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的人β-珠蛋白基因在小鼠體內(nèi)整合和表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 翟錦彬,劉德培,王晶,陳迪,鄭勇,梁植權(quán).  中華醫(yī)學(xué)雜志. 1999(02)
[4]臍血造血干細(xì)胞移植治療重型β地中海貧血[J]. 黃紹良,方建培,周敦華,陳純,吳祥元,朱為國(guó),梁曉燕,李樹濃中山醫(yī)科大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院兒科.  中華兒科雜志. 1998(11)



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